文献类型：会议

作　　者：汪洋阳 黄小波 曹三杰 文心田 张鑫淼 段素芬 阳酉萍 张丹 张小会

作者单位：四川农业大学动物医学院,动物传染病与基因芯片实验室 四川农业大学人兽共患病研究室与猪病防治研究中心

基　　金：国家自然科学基金项目(31072144);国家自然科学基金项目(30901084);国家公益性行业(农业)科研专项(20123056)

会议文献：中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会论文集

会议名称：动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

会议日期：20131021

会议地点：中国江苏徐州

主办单位：中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会;解放军军事医学科学院军事兽医研究所

出版日期：20131021

学会名称：中国畜牧兽医学会

语　　种：中文

摘　　要：本研究开展了猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因的B、C抗原位点区域的原核表达与免疫活性研究。根据S基因的B、C抗原位点区序列设计一对引物,从S基因克隆质粒19T-S1扩增了含B、C抗原位点的基因片段(以SBC表示)。将SBC插入pMD19-T载体构建了19T-SBC,再用EcoRⅠ/HindⅢ酶切SBC亚克隆至pET-32a(+)构建了重组质粒pET-32a-SBC。将pET-32a-SBC转入BL21进行诱导表达,并确定其最佳表达条件。亲和层析纯化重组SBC蛋白,分别免疫兔和猪制备阳性血清,并测定了抗体效价和抗体活性。结果表明的SBC基因片段大小为549bp,pET-32a-SBC在大肠杆菌中的最佳表达条件为IPTG诱导浓度为0.6mmol/L、最佳诱导时间为4h,最佳诱导温度为32℃,重组SBC蛋白约为20.1KDa,主要以包涵体形式存在于细胞质中。琼脂扩散试验测定兔抗SBC蛋白血清和猪抗SBC蛋白分别为1:16和1:8,间接ELISA测定效价分别为1:1280和1:640。Westernblot结果证实重组SBC蛋白与兔抗SBC蛋白血清、猪抗SBC蛋白血清以及猪抗TGEV阳性血清均发生特异性反应。本研究建立了SBC的原核表达系统并证实重组SBC蛋白具有良好的免疫活性,为开展SBC的应用研究奠定了基础。

关 键 词：猪传染性胃肠炎病毒 S基因 B、C抗原位点  原核表达 免疫原性

分 类 号：S852.65[动物医学类]