文献类型：会议

作　　者：朱于敏 于晓明 黄耀伟 黄芬芬 于瑞嵩 董世娟 李震

作者单位：美国弗吉尼亚理工学院暨州立大学 上海市农业科学院畜牧兽医研究所 江西农业大学动物医学院

会议文献：中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集

会议名称：中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会

会议日期：20120501

会议地点：中国广东广州

主办单位：中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会

出版日期：20120501

学会名称：中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会

语　　种：中文

摘　　要：基因4型戊型肝炎病毒(HEV)是流行于我国的主要基因型,本研究旨在建立基因4型猪HEV本土分离株(SAAS-FX17)的感染性克隆,为HEV的复制及致病机理研究提供技术平台。采用套式RT-PCR及RACE方法,将SAAS-FX17株的全长cDNA分10段进行扩增,得到全基因序列。经序列分析,找到均匀分布在全基因序列上的4个单一酶切位点,将全基因序列分成5段进行重新扩增,5''''端和3''''端加上2个酶切位点,得到5个两端都含有单一酶切位点的片段,分别克隆至pJET1.3载体中。将pGEM-9Zf(-)载体的多克隆位点替换为构建全长cDNA所需的6个酶切位点,经5次双酶切、连接,构建成SAAS-FX17株的全长cDNA克隆。经体外转录,转染Huh-7细胞及肝内注射SD大鼠进行体内外病毒拯救。细胞转染实验经IFA检测到ORF2蛋白的表达,证实RNA转录物可以在Huh-7细胞内增殖。动物实验结果发现2(2/5)只实验组大鼠在注射RNA后第23天粪便HEVRNA呈阳性,第30天5只大鼠粪便HEVRNA全部为阳性,一直持续至第45天。3(3/5)只大鼠在感染后第30天血清抗体阳转,在第38天抗体水平达到峰值。2(2/5)只大鼠抗体阳转时间较迟,出现在感染后的第40d,在第45天达到峰值。所有实验组大鼠血清抗体水平在感染后第52d恢复到感染前水平。本研究成功构建了第一株本土基因4型HEV的感染性克隆,证明SD大鼠可作为HEV研究的动物模型。

分 类 号：S852.65[动物医学类]