文献类型：期刊文章

作　　者：陈小明[1] 钱岳伟[1] 戚正武[1]

机构地区：[1]分子生物学国家重点实验室

出　　处：《自然科学进展（国家重点实验室通讯）》

基　　金：国家生物高技术基金

年　　份：1992

卷　　号：2

期　　号：4

起止页码：302-310

语　　种：中文

收录情况：普通刊

摘　　要：天花粉胰蛋白酶抑制剂类似物((Ala-6)-TTI)基因克隆到载体pWR590-1进行表达.表达的融合蛋白,经部分纯化后用溴化氰裂解,裂解物还原后以固相胰蛋白酶作为介体进行二硫键重组,并用此固相酶亲和层析.纯化的(Ala-6)-TTI,其抑制活性与天然抑制剂相当,在HPLC C18柱上的峰形位置以及氨基酸组成分析结果与人工合成的(Ala-6)-TTI一致.上述基因通过点突变使其读框与酵母分泌型表达载体pVT102U/α相一致,然后进行克隆并转化酵母宿主菌S-78.培养物的上清液具有明显的胰蛋白酶抑制活性,表达产物经固相胰蛋白酶亲和层析及HPLC纯化后,测定其氨基酸序列,证实(Ala-6)-TTI已正确表达.比较大肠杆菌与酵母的表达体系,后者具有更大的优越性,得率高于2mg/L,表达产物无需再进行二硫键重组.

关 键 词：南瓜族  蛋白酶抑制剂 天花粉 DNA

分 类 号：O629.8]