文献类型：期刊文章

作　　者：冉延超[1] 王一飞[1] 熊盛[1] 张美英[1] 黄文韬[1] 罗林波[1] 刘秋英[1]

机构地区：[1]广州暨南大学生物医药基地,广东广州510632

出　　处：《生物技术》

基　　金：国家十五"863"项目 ("基因工程重组蛋白Nm2 3 -H1 NDPK-A中试及临床前研究";2 0 0 1AA2 1 50 4 1 ) ;广东省科委重大攻关项目 ;A1 0 90 2 0 7 ;广州市科委重大专攻 (99-Z - 0 0 7- 0 1 );暨南大学青年基金资助项目;692 0 0 2

年　　份：2004

卷　　号：14

期　　号：2

起止页码：6-8

语　　种：中文

收录情况：CAS、CSCD、CSCD_E2011_2012、JST、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的 :为简化纯化过程 ,获得有临床研究价值的rhNDPK -A蛋白 ,构建新型rhNDPK -A基因的表达质粒 ,利用 6×His标签以Ni+ -NTA亲和层析柱纯化蛋白。方法 :将抑癌基因nm2 3-H1从质粒PBVNMH1中亚克隆于带有纯化标签的表达载体pQE4 0中。IPTG诱导表达目的蛋白。通过镍离子螯合层析柱一步纯化法纯化目的蛋白。结果 :pQE - 4 0中亚克隆的nm2 3-H1序列完全正确 ;目的蛋白在大肠杆菌M15中的表达量可达 4 9.6 % ;Ni+ -NTA亲和层析柱一步纯化后蛋白纯度为 93%。结论 :构建了带有 6×His纯化标签的新型rhNDPK -A基因表达质粒pQE -nm2 3H1,所构建质粒能高效表达目的蛋白 ,利用Ni+ -NTA亲和层析柱简便高效地纯化了表达产物。

关 键 词：核苷二磷酸激酶 六组氨酸  基因表达 蛋白纯化 镍离子螯合层析柱  

分 类 号：Q786]