文献类型：期刊文章

作　　者：黄方敏[1] 郑启新[1] 吕斌[2] 鲍同柱[3]

机构地区：[1]华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科,武汉430022 [2]华中科技大学公共卫生学院环境医学研究所,武汉430030 [3]湖北省宜昌市中心医院骨科,宜昌443003

出　　处：《华中科技大学学报（医学版）》

基　　金：国家自然科学基金资助项目 (No.30 2 0 0 0 6 1)

年　　份：2004

卷　　号：33

期　　号：2

起止页码：165-168

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2000、CAB、CAS、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、IC、JST、PUBMED、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的　构建人共刺激分子CD80 (B7 1)、T细胞识别的鳞状细胞癌抗原 3(Sart3)融合基因真核表达载体 ,并分别在原核和人成纤维细胞中表达。方法　采用RT PCR技术 ,从人胎盘组织抽提的总RNA中克隆Sart3基因的部分cDNA序列 (第 1～ 12 81bp) ,此段序列包括已报道的能诱导HLA限制性细胞毒性T淋巴细胞的抗原表位。然后将不含终止密码子的B7 1cDNA和Sart3cDNA共克隆入真核表达载体 pEGFP N1,测定核苷酸序列确定重组成功后 ,分别转染大肠杆菌和人成纤维细胞 ,利用流式细胞仪和Westernblot检测B7和Sart3的表达。结果　构建人B7、Sart3融合基因真核表达载体B7Sart3/pEGFPN。测序结果与GenBank的B7、Sart3相应序列 (NM_0 0 5 191、NM_0 14 70 6 )一致 ,阅读框无改变。流式细胞仪测定发现在转染的人成纤维细胞表面有明显的荧光增强 ,免疫印迹发现融合蛋白可以与抗B7抗体反应 ,融合蛋白分子量与B7 Sart3 EGFP的预测分子量相当。结论　成功构建真核表达载体B7Sart3/pEGFPN ,并在人成纤维细胞中表达。为下一步研究将SART3蛋白作为肿瘤疫苗应用于骨肉瘤的生物治疗打下基础。

关 键 词：Sart3基因  B7基因 克隆 基因表达  RT-PCR技术 共刺激分子 肿瘤疫苗

分 类 号：R730.3]