文献类型：期刊文章

作　　者：孙佳芝[1] 王新桐[1] 刘雪慧[1] 苗增民[2] 刘志浩[1] 王海荣[1] 柴同杰[1]

机构地区：[1]山东农业大学动物科技学院,山东泰安271018 [2]泰山医学院生命科学学院,山东泰安271018

出　　处：《中国兽医学报》

基　　金：山东农业大学博士后基金资助项目(23476)

年　　份：2014

卷　　号：34

期　　号：6

起止页码：930-935

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2011、CAB、CAS、CSCD、CSCD2013_2014、JST、RCCSE、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：为了对产气荚膜梭菌α毒素进行快速、有效的检测,本研究以单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)为基础,建立了双抗体夹心ELISA(double antibody sandwich ELISA,DAS-ELISA)方法。纯化原核表达的α毒素蛋白为免疫原,制备腹水型mAb并分离纯化作为检测抗体,免疫新西兰大白兔制备抗α毒素多克隆抗体纯化后作为捕获抗体,通过试验优化反应条件,建立标准曲线;并对建立的DAS-ELISA方法进行性能评价及初步应用。DAS-ELISA方法对α毒素的有效检测范围为5.86~375μg/L,最低检测线为4.57μg/L,比多抗-多抗双夹心ELISA具有更高的特异性和敏感性。初步应用结果显示,相同培养条件下,A^E型产气荚膜梭菌标准菌株的培养上清中,α毒素含量差异较大,A型菌(NCTC528)中α毒素含量显著高于其他菌型。本研究成功制备了高特异性的mAb,并建立了特异、灵敏、稳定的DAS-ELISA方法,为高效检测α毒素提供了有效工具。

关 键 词：产气荚膜梭菌 Α毒素 单克隆抗体  多克隆抗体 双抗体夹心ELISA

分 类 号：S852.61]