文献类型：期刊文章

作　　者：彭琬昕[1,2] 孟凡力[2,3] 金洁[1] 龚爱华[1]

机构地区：[1]江苏大学基础医学与医学技术学院生物学系,江苏镇江212013 [2]南京师范大学生命科学院,江苏南京210023 [3]南京医科大学基础医学院,江苏南京211166

出　　处：《江苏大学学报（医学版）》

基　　金：国家自然科学基金资助项目(31100964)

年　　份：2014

卷　　号：24

期　　号：2

起止页码：118-121

语　　种：中文

收录情况：CAB、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、IC、JST、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的:利用大肠埃希菌Tet-off诱导表达调控系统构建多西环素调控的稳定细胞株。方法:以pEGFPEgr-1质粒为模板,扩增含早期生长反应蛋白(early growth response-1,Egr-1)完整开放阅读框的DNA序列,经酶切后插入含四环素反应元件(tetracycline responsive element,TRE)序列的表达载体pTRE2hyg,获得重组质粒pTRE2hyg-Egr-1,将其转染293Tet-off细胞株,并用G418和多西环素筛选稳定表达Egr-1的细胞株。蛋白质印迹法检测多西环素诱导表达Egr-1情况;流式细胞术检测细胞增殖能力。结果:蛋白质印迹结果显示,外源性Egr-1蛋白表达受细胞培养液中多西环素调控,当从细胞培养液中去除多西环素后,Egr-1表达量明显升高。流式细胞检测结果显示Egr-1高表达细胞的增殖能力明显高于Egr-1低表达细胞。结论:利用Tet-off体系成功构建Egr-1诱导表达的细胞株,细胞的增殖能力受Egr-1表达水平的影响。

关 键 词：Tet-off调控系统  早期生长反应蛋白1  稳定细胞株  多西环素

分 类 号：R329.2]