文献类型：期刊文章

作　　者：杨振兴[1] 朱建波[1] 李占鸿[1] 李卓然[1] 何于雯[1] 谢佳芮[1] 李华春[1] 廖德芳[1] 杨恒[1]

YANG Zhen-xing;ZHU Jian-bo;LI Zhan-hong;LI Zhuo-ran;HE Yu-wen;XIE Jia-rui;LI Hua-chun;LIAO De-fang;YANG Heng(Yunnan Tropical and Subtropical Animal Virus Disease Laboratory,Yunnan Veterinary and Animal Science Institute,Kunming 650224,China)

机构地区：[1]云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室,云南昆明650224

出　　处：《中国兽医科学》

基　　金：国家重点研发计划项目（2017YFC1200505,2016YFD0500908）;云南省中青年学术和技术带头人后备人才培养项目（2017HB055）

年　　份：2019

卷　　号：49

期　　号：9

起止页码：1104-1111

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2017、CAB、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD_E2019_2020、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：为建立检测蓝舌病病毒(BTV)和流行性出血病病毒(EHDV)的快速诊断方法,笔者根据BTV的第10基因节段(Seg-10)和EHDV的第5基因节段(Seg-5)序列,分别设计BTV与EHDV的特异性引物和TaqMan探针,经过反应条件优化,建立了同时检测两种病毒的双重荧光定量RT-PCR方法,并进行了特异性、灵敏度、重复性和临床样品检测验证。用该方法对BTV Seg-10和EHDV Seg-5节段的体外转录ssRNA为模板绘制标准曲线,相关系数(R^2)均大于0.995,线性关系较好;该方法可检测不同血清型的BTV和EHDV,与阿卡斑病病毒(AKAV)、中山病病毒(CHUV)、小反刍兽疫病毒(PPRV)、口蹄疫病毒(FMDV)和牛流行热病毒(BEFV)无交叉反应,表明该方法特异性强;对2种标准品的检出极限均为10 copies/uL,比常规RT-PCR敏感性高10倍;组内和组间重复试验的变异系数均小于2%;用所建立的双重荧光定量RT-PCR方法及常规RT-PCR方法,对100份血液样品和50份病毒液分别进行检测,符合率均大于90%。以上结果表明所建立的双重荧光定量RT-PCR方法具有快速、准确、敏感和稳定等优点,为BTV和EHDV感染的早期快速诊断、高通量检测及流行病学调查提供了有效的技术方法。

关 键 词：蓝舌病病毒 流行性出血病病毒  双重荧光定量RT-PCR  

分 类 号：S852.65]