文献类型：期刊文章

作　　者：张书阳[1,2] 谢彩华[2] 闫若潜[2] 吴志明[2] 赵明军[2] 赵雪丽[2] 刘梅芬[2] 杨晓璐[1,2] 张代宝[3] 张林海[4]

机构地区：[1]河南科技大学动物科技学院,河南洛阳471003 [2]河南省动物疫病预防控制中心,河南郑州450008 [3]郑州市动物疫病预防控制中心,河南郑州450005 [4]河南省卫辉市动物疫病预防控制中心,河南卫辉453100

出　　处：《中国兽医科学》

基　　金：河南省科技创新人才计划项目(豫科人组[2011]1号)

年　　份：2014

卷　　号：44

期　　号：9

起止页码：974-980

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2011、CAB、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2013_2014、IC、JST、RCCSE、WOS、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：为研制具有鸡白细胞介素-6、2(ChIL-6,ChIL-2)协同免疫增强作用的鸡基因工程复合免疫增强剂,采用重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法将ChIL-6和ChIL-2基因构建成ChIL-6-linker-ChIL-2嵌合基因;对嵌合基因进行原核表达,采用自行创新的专利纯化方法对表达的rChIL-6-linker-ChIL-2蛋白(重组融合蛋白)进行纯化。采用间接ELISA方法检测重组融合蛋白分别与抗ChIL-6、抗ChIL-2单克隆抗体的特异性免疫反应活性,采用MTS法检测重组融合蛋白体外促鸡外周血T淋巴细胞和脾淋巴细胞的增殖活性。结果显示,成功构建了ChIL-6-linker-ChIL-2嵌合基因及其重组表达质粒rpQE-30-ChIL-6-linker-ChIL-2,表达的重组融合蛋白的分子质量约为40ku,纯化后的纯度在96%以上。该重组融合蛋白可分别与抗ChIL-6、抗ChIL-2单克隆抗体发生特异性免疫反应,并具有显著的促鸡外周血T淋巴细胞和脾淋巴细胞增殖活性,其活性优于任一重组蛋白对照。本研究结果初步证明了rChIL-6-linker-ChIL-2蛋白在对鸡免疫细胞的增殖作用方面与rChIL-6和rChIL-2蛋白的作用相似,为进一步研究rChIL-6-linker-ChIL-2蛋白在鸡体内的活性奠定了基础。

关 键 词：鸡  白细胞介素-6基因  白细胞介素-2基因  嵌合基因 融合表达  活性

分 类 号：S852.4]