文献类型：期刊文章

作　　者：熊盛[1] 钱垂文[1] 黄立[1] 王一飞[1] 张美英[1] 李久香[1] 严玖凤[2] 王小宁[2] 张晓伟[2] 毕志刚[2]

机构地区：[1]暨南大学生物医药研究开发基地,广州510630 [2]北京凯正生物工程发展有限责任公司,北京100850

出　　处：《生物工程学报》

基　　金：国家 8 63高技术研究项目 (No .2 0 0 1AA2 15 0 41);广东省科技厅重大攻关项目 (No .A10 90 2 0 7);广州市天河区科技攻关项目 (No .0 3 2G0 17)基金资助~~

年　　份：2004

卷　　号：20

期　　号：1

起止页码：85-89

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2000、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、EBSCO、EMBASE、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：对重组人核苷二磷酸激酶A(rhNDPK A)进行纯化 ,并对重组产物的理化性质及在溶液中的聚合状态进行鉴定。NDPK A工程菌发酵后的菌体高压匀浆 ,然后微孔过滤、超滤浓缩 ,所得样品经DEAE阴离子交换、CibacronBlue亲和层析、分子筛层析三步纯化后 ,以SDS PAGE和RP HPLC分析纯化产物的纯度 ,RP HPLC测定酶活性。合格制品以基质辅助激光解析飞行时间质谱测定相对分子质量 (MW ) ;Edman降解法测定N末端序列 ;多角度激光散射法测定重组产物在溶液中的表观分子量。结果表明 ,rhNDPK A纯化产物的SDS PAGE纯度为 97 3% ,RP HPLC纯度为 99 2 % ;比活性为 (90 0± 10 0 )u mg ;单体相对分子质量为 170 17,与NDPK A分子量理论值相差 132。测序结果表明 ,rhNDPK AN末端缺失Met残基 ,其理论分子量为 170 17,与飞行质谱测定结果完全一致。表观分子量测定结果表明 ,rhNDPK A在溶液中形成六聚体 ,表观分子量为 10 2kD。上述结果说明 ,NDPK A重组产物具与天然产物相同的自发形成六聚体性质 ,这为NDPK A新药开发和机理研究打下了良好基础。

关 键 词：人核苷二磷酸激酶A  飞行质谱  多角度激光散射  表观分子量  六聚体

分 类 号：Q55] Q814