文献类型：期刊文章

作　　者：赵宝华[1] 许崇波[2] 边艳青[1] 段相林[1] 朱平[3]

机构地区：[1]河北师范大学生命科学学院,石家庄050016 [2]宁夏大学生物工程系,银川750021 [3]中国人民解放军军需大学军事兽医研究所,长春130062

出　　处：《中国生物化学与分子生物学报》

基　　金：军队医药卫生基金资助项目 (No .98Q0 76)~~

年　　份：2003

卷　　号：19

期　　号：6

起止页码：690-697

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2000、BIOSISPREVIEWS、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、JST、PUBMED、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：应用RT PCR技术 ,从分泌具有中和活性的抗A型产气荚膜梭菌α毒素单克隆抗体 (McAb)的杂交瘤细胞株 1A8中 ,分别扩增出抗体VH 和VL 基因 ,用linker (Gly4Ser) 3 基因 ,将VH 和VL 基因连接成单链抗体 (ScFv)基因 ,并将其克隆至pGEM T载体中 .经核苷酸序列分析证实 ,VH 和VL 基因及linker基因拼接正确 ,ScFv 1A8基因全长为 72 6bp ,编码2 4 2个氨基酸 ,VH 和VL 基因符合功能性重排的鼠抗体可变区基因特征 ,分别属于鼠免疫球蛋白重链Ⅱ (A)和轻链κⅣ家簇 .将ScFv 1A8基因克隆至表达载体pHOG2 1中 ,构建了重组质粒pHOG 1A8,然后转化至受体菌XL1 BLUE中 ,得到重组菌株XL1 BLUE (pHOG 1A8) .ELISA检测和SDS PAGE分析表明 :经IPTG诱导后所表达的目的蛋白存在于重组菌株XL1 BLUE (pHOG 1A8)的胞周质中 .经薄层扫描分析 :重组菌株XL1 BLUE(pHOG 1A8)的蛋白表达产物占菌体可溶性蛋白的 1 2 % ,其相对分子量约为 31kD .ScFv的生物学活性研究表明 ,ScFv蛋白不但具有中和磷脂酶C的活性 。

关 键 词：单链抗体小分子  基因克隆 表达  生物学活性 Α毒素 A型产气荚膜梭菌

分 类 号：Q786] Q936