文献类型：期刊文章

作　　者：于晓虹[1] 陈枢青[2]

机构地区：[1]浙江大学医学院生物化学教研室,浙江杭州310031 [2]浙江大学药学院生物制药研究室,浙江杭州310031

出　　处：《中国药学杂志》

基　　金：浙江省自然科学基金项目 ( 3 0 2 110 )

年　　份：2003

卷　　号：38

期　　号：9

起止页码：707-710

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2000、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、EI(收录号：2004027811970)、EMBASE、IC、IPA、JST、PUBMED、RCCSE、RSC、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的　构建高效表达菌株 ,以大量表达大肠杆菌T蛋白 ,为后续的新药作用靶点研究提供活性蛋白质材料。方法　利用高效表达质粒pET2 6b+ 克隆了大肠杆菌TyrA基因 ,并在其C端融合了一个由 6个组氨酸组成的his tag以利分离纯化。 结果　T蛋白的表达量达每 1L培养液 2 0 0mg ,细胞裂解液经一次his tag亲和柱色谱 ,纯度达 98% ,分支酸变位酶和预苯酸脱氢酶的比活性分别为 130和 98U·mg-1。结论　本法表达的大肠杆菌T蛋白 ,表达量高 ,纯化容易 ,酶活性正常 ,为进一步研究T蛋白的结构与功能 ,并进行新药设计奠定了基础。

关 键 词：大肠杆菌T蛋白  分离  纯化 分支酸变位酶  预苯酸脱氢酶  

分 类 号：Q78]