文献类型：期刊文章

作　　者：王思源[1] 向思琦[2] 王雅妮[1] 朱林[3] 朱柳[1] 向明钧[1]

WANG Si-Yuan;XIANG Si-Qi;WANG Ya-Ni;ZHU Lin;ZHU Liu;XIANG Ming-Jun(Department of Biochemistry and Immunology,Medical Research Center,Institute of Medicine,Jishou University,Jishou 416000,Hunan,China;Department of Bioengineering,Biological Science and Engineering School,North University of Nationalities,Yinchuan 750021,China;Molecular Biology Research Center&Center for Medical Genetics,School of Life Sciences,Central South University,Changsha 410078,China)

机构地区：[1]吉首大学医学院生物化学与免疫学系医学研究中心,湖南吉首416000 [2]北方民族大学生物科学与工程学院,银川750021 [3]中南大学生命科学学院分子生物学研究中心,长沙410078

出　　处：《中国生物化学与分子生物学报》

基　　金：国家自然科学基金(No.81360397);吉首大学研究生科研创新项目(No.JGY201772)资助~~

年　　份：2019

卷　　号：35

期　　号：9

起止页码：996-1005

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2017、BIOSISPREVIEWS、CAS、CSCD、CSCD2019_2020、JST、PUBMED、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：凋亡抑制蛋白-2(inhibitor of apoptosis protein-like protein-2,ILP-2)是新发现的凋亡抑制蛋白质,其抑制肿瘤细胞凋亡促进其生长的分子机制有待阐明,而细胞外基质蛋白1(extracellular matrix protein 1,ECM1)所介导的信号通路与肿瘤细胞的生长密切相关。本研究通过免疫共沉淀法,检测到乳腺癌MCF-7细胞中ILP-2与ECM1(P85)存在相互作用。分别用化学合成的ILP-2-siRNA及ECM1-siRNA干扰处理MCF-7细胞。以未转染的MCF-7细胞和转染阴性对照siRNA的细胞分别作为空白和阴性对照,利用蛋白质印迹法,检测ILP-2-siRNA干扰后ECM1、FAK、Akt蛋白的表达,以及ECM1-siRNA干扰后ILP-2蛋白的表达。其结果显示,与空白对照组相比,ILP-2-siRNA-5(0. 32±0. 095)及ECM1-siRNA-1 (0. 42±0. 024)干扰效率较高(均P<0. 001);ILP-2-siRNA-5组待测蛋白质的相对表达量均显著下调(ECM1,0. 19±0. 013,P<0. 001),FAK (0. 64±0. 069,P<0. 01),Akt (0. 35±0. 120,P<0. 01)),ECM1-siRNA-1组ILP-2 (0. 48±0. 060)蛋白表达也显著下调,表明ILP-2与ECM1-mTOR信号通路联系密切。分别在ILP-2-siRNA和ECM1-siRNA转染24、48和72 h时,使用CCK-8法检测乳腺癌细胞的增殖,并用TUNEL标记荧光法和吖啶橙/溴化乙啶双荧光染色法(AO/EB)检测其凋亡。结果显示,与空白对照组相比,ILP-2-siRNA-5组和ECM1-siRNA-1组的存活率均显著下降(P<0. 001),凋亡率均明显升高(P<0. 001)。利用共转染技术同时敲低ILP-2和ECM1表达,检测细胞的凋亡情况。结果显示,在干扰处理后24 h(0. 55±0. 122),48 h(0. 80±0. 107)和72h(0. 73±0. 091)的凋亡率显著均高于阴性对照组(P <0. 05)。但与只敲低ILP-2或ECM1相比,无显著性差异(P>0. 05)。表明ILP-2可能是通过与ECM1作用激活FAK-mTOR信号通路,影响MCF-7细胞的增殖和凋亡,对乳腺癌细胞MCF-7的生长发挥了积极的作用。

关 键 词：凋亡抑制蛋白-2  细胞外基质蛋白1 乳腺癌细胞MCF-7

分 类 号：R737.9]