文献类型：期刊文章

作　　者：王菲[1] 胡春辉[1] 于浩[1]

WANG Fei;HU Chun-hui;YU hao(Shandong Provincial Key Laboratory of Applied Mycology,College of Life Science,Qingdao Agricultural University,Qingdao 266109,China)

机构地区：[1]青岛农业大学生命科学学院山东省应用真菌重点实验室

出　　处：《中国生物工程杂志》

基　　金：国家自然科学基金青年项目(31600086);山东省自然科学基金青年基金(ZR2016CQ06)资助项目

年　　份：2019

卷　　号：0

期　　号：7

起止页码：15-23

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAB、CAS、CSCD、CSCD2019_2020、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)KT2440中的6-羟基烟酸(6HNA)3-单加氧酶(NicC)是烟酸代谢过程中的关键酶。NicC通过在吡啶环上加羟基对吡啶环进行活化,从而使吡啶环可在双加氧酶催化下开环,最终被完全降解。通过去除NicC的N端稀有密码子增加了NicC的表达量,进一步利用Ni-Sepharose重力柱对NicC进行了纯化。通过实验发现,NicC的最适反应温度为30~40℃,最适反应pH为8.0。Cd2+对NicC的酶活有明显的抑制作用。当NADH的浓度为0.25mmol/L时,底物6HNA所对应的NicC的最大酶活为14.1U/mg,Km值为51.8μmol/L;当6HNA的浓度为0.25mmol/L时,底物NADH所对应的NicC的最大酶活为10.79U/mg,Km值为15.0μmol/L。通过HPLC和LC-MS分析表明,NicC可以在NADH和氧气的参与下催化6HNA转化生成2,5-二羟基吡啶(2,5-DHP)和甲酸,还可以将对羟基苯甲酸转化生成对苯二酚。同位素标记实验表明,产物2,5-DHP中的氧原子来源于参与反应的氧气。为研究吡啶类化合物微生物代谢提供了理论基础。

关 键 词：6-羟基烟酸3-羟化酶  酶学性质 催化机制  同位素标记

分 类 号：X703]