文献类型：期刊文章

作　　者：李红梅[1,2] 江晓[1] 刘助红[2] 赵哲[1] 任春华[1] 胡超群[1] 石磊[2] 王广军[3]

机构地区：[1]中国科学院南海海洋研究所热带海洋生物资源与生态重点实验室,广州510301 [2]广州迪澳生物科技有限公司,广州510663 [3]中国水产科学研究院珠江水产研究所,广州510380

出　　处：《水生生物学报》

基　　金：广东省中国科学院全面战略合作项目(2011B090300040);广东省鱼病防治专项资金项目资助

年　　份：2015

卷　　号：39

期　　号：1

起止页码：142-148

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、BIOSISPREVIEWS、CAB、CAS、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2015_2016、JST、PROQUEST、RCCSE、WOS、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：研究利用ESE-Quant tube scanner检测平台,建立了一套基于环介导等温扩增技术(Loop-Mediated Isothermal Amplification,LAMP)的实时荧光检测方法,用于白斑综合征病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)的检测;并在此基础上,与巢式PCR、Real-time PCR和其他已发表的4种LAMP方法在检测灵敏度、实际应用方面进行比较。结果显示,研究建立的实时荧光LAMP检测方法在63℃恒温反应30min可检测到最低为105倍稀释的基因组DNA模板,与Real-time PCR检测方法的灵敏度相当,高于巢式PCR和其他已发表的4种LAMP方法的检测灵敏度;而且特异性较好,与传染性皮下及造血组织坏死病毒等5种常见对虾病原DNA均无交叉反应。通过构建质粒进一步进行灵敏度测试显示,本研究建立的实时荧光LAMP检测方法最低检测限度为24个拷贝质粒DNA,检出时间亦为30min。通过对66份待检样品的检测结果显示,实时荧光LAMP检测方法的检出阳性率为7.57%,准确率为100%,高于其他WSSV的检测方法。因此,研究建立的WSSV实时荧光LAMP检测方法,操作简单,反应速度快,特异性好,灵敏度高,成本低廉,可以直观、实时地观察反应的进行情况,适合对虾养殖现场及诊断实验室的WSSV快速检测。

关 键 词：白斑综合症病毒 实时荧光LAMP  ESE-Quant  TUBE SCANNER

分 类 号：S945.4]