文献类型：期刊文章

作　　者：陈云雨[1,2] 牛夏忆[1] 李妍[3] 刘晓平[1]

Yunyu Chen;Xiayi Niu;Yan Li;Xiaoping Liu(Center for New Drug Screening&Evaluation,School of Pharmacy,Wannan Medical College,Wuhu 241002,Anhui,China;Laboratory of Chemical Biology,Changchun Institute of Applied Chemistry,Chinese Academy of Sciences,Changchun 130022,Jilin,China;National Center for Microbial Drug Screening,Institute of Medicinal Biotechnology,Chinese Academy of Medical Sciences&Peking Union Medical College,Beijing 100050,China)

机构地区：[1]皖南医学院药学院新药筛选与评价中心,安徽芜湖241002 [2]中国科学院长春应用化学研究所化学生物学实验室,吉林长春130022 [3]中国医学科学院-北京协和医学院医药生物技术研究所国家新药(微生物)筛选中心,北京100050

出　　处：《生物工程学报》

基　　金：国家自然科学基金(No.81703546);安徽省自然科学基金(No.1808085QH265);吉林省科技发展计划(No.20160520045JH);皖南医学院博士科研启动基金(No.RCQD201617);皖南医学院大学生科研资助金(No.WK2018S54)资助~~

年　　份：2019

卷　　号：35

期　　号：4

起止页码：707-717

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2017、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2019_2020、EBSCO、EMBASE、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：旨在以β-catenin/Lef1相互作用为靶标,建立基于ELISA原理的适用于靶向β-catenin/Lef1相互作用小分子抑制剂筛选的高通量筛选模型。利用DNA重组技术,将构建的β-catenin-pET-30a(+)重组质粒转化大肠杆菌Escherichia coli Rosetta (DE3),经诱导培养后进行β-catenin原核表达。采用亲和层析方法分离纯化β-catenin后,以GSTPulldown实验进行生物学活性鉴定。利用ELISA原理建立β-catenin/GST-Lef1结合的分子模型,通过优选GST-Lef1最佳包被浓度和β-catenin最佳反应浓度,建立适用于靶向β-catenin/Lef1相互作用小分子抑制剂筛选的高通量筛选模型。SDS-PAGE和Western blotting实验证实β-catenin的原核表达。GST Pulldown实验证实纯化的β-catenin具有良好的生物学活性。通过对基于ELISA原理建立的β-catenin/GST-Lef1结合的分子模型优化,选用10μg/mL GST-Lef1和6μg/mLβ-catenin建立ELISA高通量筛选模型,其Z?因子为0.76。本研究成功建立了基于ELISA原理的β-catenin/GST-Lef1结合的分子模型,为靶向β-catenin/Lef1相互作用小分子抑制剂的高通量筛选奠定了基础。

关 键 词：Wnt抑制剂  Β-CATENIN β-catenin/Lef1相互作用  酶联免疫吸附实验 高通量筛选

分 类 号：R91[药学类]