文献类型：期刊文章

作　　者：陈守义[1] 余新炳[1] 徐劲[1] 虢国泰[2] 蒋忠军[2] 吴德[1] 胡旭初[1] 李军涛[1]

机构地区：[1]中山大学中山医学院病原生物学部,广州510080 [2]广州军区联勤部医学研究所

出　　处：《热带医学杂志》

基　　金：广东省科学技术团队项目及广东省自然基金资助(No.012349)

年　　份：2003

卷　　号：3

期　　号：1

起止页码：22-24

语　　种：中文

收录情况：CAB、CAS、RCCSE、UPD、WOS、ZGKJHX、ZR、普通刊

摘　　要：目的 构建华支睾吸虫囊蚴cDNA表达文库,为筛选特异诊断抗原和疫苗候选抗原奠定基础。方法提取华支睾吸虫囊蚴总RNA;用Clontech公司SMARTTM cDNA文库构建试剂盒并按其操作方法进行,进行反转录合成双链cDNA。PCR产物经蛋白酶K消化、纯化后,进行SfiI酶切;用ChromaSpin 400柱将酶切产物进行分级分离,经1.1％琼脂糖凝胶电泳鉴定,回收0.4～4kb的组分,并与λTriplEx2载体连接;连接产物经体外蛋白包装,产生未扩增文库;检测未扩增文库滴度和重组效率后,进行文库的扩增,并测定扩增文库的滴度;随机挑取9个噬菌斑,用载体克隆位点两端的引物进行PCR扩增,以检测所构建的cDNA文库的质量。结果 未扩增文库滴度达7.0×107pfu/ml,扩增文库滴度达2.5×108pfu/ml;用载体两端的引物进行PCR鉴定,结果显示:扩增文库中,含1kb以上的占30％左右,1kb～500bp占69％。结论已成功地获得一高质量的华支睾吸虫囊蚴cDNA表达文库。

关 键 词：华支睾吸虫囊蚴 CDNA表达文库 构建  鉴定  

分 类 号：R383.22]