文献类型：期刊文章

作　　者：黄坚[1] 龙青[2] 任启生[2] 宋新荣[2] 张茂林[1] 殷震[1]

机构地区：[1]中国人民解放军军需大学军事兽医研究所,吉林长春130062 [2]北京江中药物研究所,北京100050

出　　处：《中国生化药物杂志》

年　　份：2003

卷　　号：24

期　　号：2

起止页码：58-61

语　　种：中文

收录情况：CAB、CAS、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD_E2011_2012、IC、RCCSE、普通刊

摘　　要：目的构建含rPA全长基因的重组酵母胞内表达质粒pPIC9K rPA ,并在毕赤酵母中进行表达。方法用限制性内切酶BamHI和NotI将含有rPA全长基因的质粒pJZ1 6双酶切后 ,克隆至酵母表达载体pPIC9K中 ,构建酵母重组表达质粒。rPA基因经DNA序列测定准确无误。通过电穿孔法转染毕赤酵母菌GS1 1 5 ,PCR鉴定阳性酵母转化子 ,将rPA基因整合入酵母基因组DNA ,在毕赤酵母中实现了胞内非融合表达。表达产物进行SDS PAGE、Western blots以及溶纤维蛋白活性检测。结果表达产物以胞内包涵体的形式存在 ,未糖基化。SDS PAGE结果显示表达蛋白质的相对分子量约为 39kD。Western blots检测表明表达蛋白质能与单克隆抗体发生特异性反应。包涵体经 8mol L脲溶液溶解后 ,有明显的溶纤维蛋白活性。

关 键 词：rPA(reteplase)  毕赤酵母 表达  

分 类 号：Q78] Q25