文献类型：期刊文章

作　　者：陈守义[1] 余新炳[1] 徐劲[1] 蒋忠军[2] 吴德[1] 何东苟[1] 林睿[3]

机构地区：[1]中山大学中山医学院病原生物学部,广州市510089 [2]广州军区联勤部医学研究所 [3]广西南宁寄生虫病研究所

出　　处：《中国热带医学》

基　　金：广东省科学技术团队项目;广东省自然基金资助 (0 1 2 349)

年　　份：2003

卷　　号：3

期　　号：3

起止页码：282-284

语　　种：中文

收录情况：CAB、CAS、RCCSE、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的　构建华支睾吸虫cDNA表达文库 ,为筛选特异诊断抗原和疫苗候选抗原奠定基础。　方法　提取华支睾吸虫总RNA ;用Clontech公司SMARTTMcDNA文库构建试剂盒操作方法 ,进行反转录合成双链cDNA ;PCR产物纯化后 ,进行SfiI酶切 ;用ChromaSpin 40 0柱将酶切产物进行分级分离 ,回收 0 .4～ 4kb的组分 ,并与λTriplEx2载体连接、体外蛋白包装 ,产生未扩增文库 ;检测未扩增文库滴度和重组效率后 ,进行文库的扩增 ,并测定扩增文库的滴度及鉴定。　结果　未扩增文库滴度达 7.5× 10 7pfu/ml ,扩增文库滴度达 2 .7× 10 8pfu/ml ;用载体两端的引物进行PCR鉴定 ,显示 :所选噬菌体中均含有重组的cDNA ,大小在 5 0 0bp以上。　结论　已成功地获得一高质量的华支睾吸虫cD

关 键 词：华支睾吸虫 CDNA表达文库 构建  筛选  

分 类 号：R383.22]