期刊文章详细信息
微量酶标夹心杂交法定量检测人iNOS-mRNA
An enzyme—linked sandwich hybridization on microplate for quantification of human iNOS mRNA
文献类型:期刊文章
机构地区:[1]温州医学院检验医学与公共卫生学院细胞与分子医学研究所,浙江温州325027
年 份:2003
卷 号:10
期 号:1
起止页码:36-39
语 种:中文
收录情况:内刊
摘 要:目的:建立一种高灵敏度、高特异性、精确、简便的微孔板酶联夹心杂交技术,对人iNOS—mRNA进行定量检测。方法:设计两条特异探针,其中一条为用捕获探针,5’端连接氨基,能与微孔板表面的NOS基团共价结合,"竖直"地包被在微孔中,另一个为检测探针,3’端带有生物素标记。用脂多糖(LPS)刺激人外周血单个核细胞24h后,提取巨噬细胞总RNA,进行RT—PCR扩增,PCR产物热变性后加入到已包被捕获探针的微孔板内,并加入检测探针进行夹心杂交,最后加入链亲和素—辣根过氧化物酶(SAV—HRP)及底物,在450nm波长检测杂交信号。结果:该方法检测iNOS—mRNA的灵敏度明显高于RT—PCR—琼脂糖凝胶电泳;特异性高,RT—PCR和酶联夹心杂交均无非特异阳性信号出现;重复性良好。结论:本方法操作简单、灵敏度高、特异性强、结果数据化,适合于iNOS—mRNA的定量检测。
关 键 词:微孔板酶联夹心杂交技术 定量检测 诱导性一氧化氮合成酶 RT—PCR 分子生物学检测
分 类 号:R446]
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