文献类型：期刊文章

作　　者：许艳芳[1] 吕建新[1]

机构地区：[1]温州医学院检验医学与公共卫生学院细胞与分子医学研究所,浙江温州325027

出　　处：《检验医学教育》

年　　份：2003

卷　　号：10

期　　号：1

起止页码：36-39

语　　种：中文

收录情况：内刊

摘　　要：目的:建立一种高灵敏度、高特异性、精确、简便的微孔板酶联夹心杂交技术,对人iNOS—mRNA进行定量检测。方法:设计两条特异探针,其中一条为用捕获探针,5’端连接氨基,能与微孔板表面的NOS基团共价结合,"竖直"地包被在微孔中,另一个为检测探针,3’端带有生物素标记。用脂多糖(LPS)刺激人外周血单个核细胞24h后,提取巨噬细胞总RNA,进行RT—PCR扩增,PCR产物热变性后加入到已包被捕获探针的微孔板内,并加入检测探针进行夹心杂交,最后加入链亲和素—辣根过氧化物酶(SAV—HRP)及底物,在450nm波长检测杂交信号。结果:该方法检测iNOS—mRNA的灵敏度明显高于RT—PCR—琼脂糖凝胶电泳;特异性高,RT—PCR和酶联夹心杂交均无非特异阳性信号出现;重复性良好。结论:本方法操作简单、灵敏度高、特异性强、结果数据化,适合于iNOS—mRNA的定量检测。

关 键 词：微孔板酶联夹心杂交技术  定量检测  诱导性一氧化氮合成酶 RT—PCR  分子生物学检测

分 类 号：R446]