文献类型：期刊文章

作　　者：袁仕善[1] 邓志高[1] 谭云洪[2] 杨双[1] 王云[1] 孙文霞[1]

机构地区：[1]湖南师范大学医学院分子生物学研究室,湖南长沙410013 [2]湖南省结核病防治研究所检验科,湖南长沙410013

出　　处：《湖南师范大学学报（医学版）》

基　　金：湖南省教育厅资助科研项目(10C0920)

年　　份：2013

卷　　号：10

期　　号：3

起止页码：8-10

语　　种：中文

收录情况：JST、RCCSE、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的:克隆和表达结核分枝杆菌ESAT-6。方法:以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,利用聚合酶链式反应(PCR)扩增esat-6基因片段,克隆至pMD18-T载体,PCR筛选阳性克隆并测序。将esat-6基因亚克隆至pET-28a,构建pET-esat-6重组质粒,转化入大肠杆菌BL21感受态,PCR和双酶切鉴定阳性克隆,经IPTG诱导表达,用His-bindTM亲和层析柱纯化ESAT-6,SDS-PAGE和Western blotting鉴定。结果:PCR扩增出esat-6基因的特异片段,成功构建重组表达质粒pET-esat-6,并在BL21获得表达,纯化的ESAT-6能被结核病人血清所识别。结论:成功克隆和表达获得重组蛋白ESAT-6。

关 键 词：结核分枝杆菌 ESAT-6 克隆 表达  

分 类 号：R378]