文献类型：期刊文章

作　　者：李丹彤[1] 何庆[1] 王东亮[1] 喻蓓蕾[1] 袁倩[1] 刘伟姣[1] 杨毅[1] 王乃东[1]

LI Dantong;HE Qing;WANG Dongliang;YU Beilei;YUAN Qian;LIU Weijiao;YANG Yi;WANG Naidong(R&D Center for Animal Reverse Vaccinology of Hunan Province,Hunan Provincial Key Laboratory of Protein Engineering in Animal Vaccines,College of Veterinary Medicine,Hunan Agricultural University,Changsha 410128,China)

机构地区：[1]湖南农业大学动物医学院兽用蛋白质工程疫苗湖南省重点实验室/兽用疫苗逆向创制湖南省工程研究中心,湖南长沙410128

出　　处：《中国兽医学报》

基　　金：湖南省技术攻关“揭榜挂帅”资助项目(2021NK1030);湖南省自然科学基金资助项目(2022JJ30298)

年　　份：2024

卷　　号：44

期　　号：11

起止页码：2309-2315

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2023、CSCD、CSCD_E2023_2024、核心刊

摘　　要：猪丁型冠状病毒(PDCoV)是近年来新发现的冠状病毒,可引起仔猪严重的腹泻、呕吐、脱水甚至死亡。S蛋白是PDCoV的重要结构蛋白,决定着病毒的宿主或组织嗜性,也是研制PDCoV疫苗和检测方法的重要靶点。为制备PDCoV S蛋白的单克隆抗体,本研究基于国内PDCoV流行毒株S蛋白胞外域序列,构建S蛋白重组质粒转化DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选及PCR鉴定重组Bacmid,通过昆虫-杆状病毒系统表达S蛋白。将获得的S蛋白免疫BALB/c小鼠,并以免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,通过间接ELISA方法和亚克隆筛选出稳定分泌抗体的阳性杂交瘤细胞。免疫印迹和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定出5株(2E5、4D5、5D10、2F7和5A9)特异性识别S蛋白的杂交瘤细胞。中和试验表明,3株单克隆抗体(2E5、4D5和5D10)具有病毒中和作用。本研究成功表达了S蛋白及制备了5株能稳定分泌与PDCoV病毒和S蛋白特异性结合的单克隆抗体,为进一步研究S蛋白的结构与功能、PDCoV感染的检测方法开发、预防或治疗用制剂等研究奠定了重要基础。

关 键 词：猪丁型冠状病毒  S蛋白 昆虫-杆状病毒表达  单克隆抗体 中和抗体

分 类 号：S852.65]