文献类型：期刊文章

作　　者：刘润楷[1] 贾玉萱[2] 赵鑫钰[3,4,5] 李尊岭[3,4,5]

LIU Runkai;JIA Yuxuan;ZHAO Xinyu;LI Zunling(Department of Laboratory Medicine,Yantai Yuhuangding Hospital,Yantai 264003,Shandong,P.R.China;Operating Room,Yantaishan Hospital Affiliated to Binzhou Medical University,Yantai 264003,Shandong,P.R.China;Department of Biochemistry and Molecular Biology,School of Basic Medicine,Binzhou Medical University,Yantai 264003,Shandong,P.R.China;Shandong Province Tumor Immunotherapy Research Innovation Team,Yantai 264003,Shandong,P.R.China;Shandong Provincial Medicine and Health Respiratory Infection and Tumor Immunity Key Laboratory,Yantai 264003,Shandong,P.R.China)

机构地区：[1]烟台毓璜顶医院检验科,山东烟台264003 [2]滨州医学院附属烟台山医院手术室,山东烟台264003 [3]滨州医学院基础医学院生物化学与分子生物学教研室,山东烟台264003 [4]山东省肿瘤免疫治疗研究创新团队,山东烟台264003 [5]山东省医药卫生呼吸系统感染与肿瘤免疫重点实验室,山东烟台264003

出　　处：《滨州医学院学报》

基　　金：国家自然科学基金(82150101);国家自然科学基金(82070225)。

年　　份：2024

卷　　号：47

期　　号：6

起止页码：452-458

语　　种：中文

收录情况：普通刊

摘　　要：目的获得程序性死亡受体-1基因(Pdcd1)敲除鼠,即C57BL/6J-Pdcd1^(-/-)鼠;构建小鼠荷瘤模型,初步探究Pdcd1基因敲除对肿瘤生长的影响。方法应用CRISPR/Cas9技术,将Cas9 mRNA和靶向Pdcd 1的gRNA显微注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中,利用非同源重组修复引入突变的方式,造成Pdcd1基因蛋白读码框移码和功能缺失,获得C57BL/6J-Pdcd1^(+/-)杂合子小鼠;杂合子小鼠自交,获得Pdcd1基因敲除的纯合子小鼠(C57BL/6J-Pdcd1^(-/-));接下来,应用PCR和基因测序确定小鼠基因型。提取C57BL/6J-Pdcd 1^(+/+)和C57BL/6J-Pdcd1^(-/-)小鼠外周血,流式细胞仪检测各免疫细胞水平;取小鼠脾脏CD3^(+)T细胞,anti-CD3/CD28 beads激活4天后,流式细胞仪检测活化CD3^(+)T细胞表面PD-1的表达。将3×10^(6)个小鼠结肠癌细胞MC38接种于C57BL/6J-Pdcd1^(+/+)和C57BL/6J-Pdcd 1^(-/-)小鼠皮下,每隔2天测量一次肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线;取小鼠肿瘤组织,拍照并称重,分析Pdcd1基因敲除对肿瘤生长大小的影响。结果测序结果序列对比表明,Pdcd1基因2-4号外显子之间缺失1691 bp,即Pdcd1基因产生了读码框移码突变;小鼠基因型的检测结果显示,引物P1/P2 PCR获得单一的341 bp片段,P3/P4 PCR不能获得条带,成功构建C57BL/6J-Pdcd1^(-/-)小鼠。流式检测结果显示,与C57BL/6J-Pdcd 1^(+/+)小鼠相比较,C57BL/6J-Pdcd 1^(-/-)小鼠外周血各免疫细胞水平无明显变化,活化的CD3^(+)T细胞表面几乎检测不到PD-1的表达。MC38小鼠皮下荷瘤模型表明,与WT小鼠相比较,C57BL/6J-Pdcd 1^(-/-)小鼠荷瘤后肿瘤生长显著被抑制。结论成功构建Pdcd1基因敲除鼠,小鼠Pdcd1基因敲除能够显著抑制肿瘤生长。

关 键 词：免疫检查点  PD-1 CD3^(+)T细胞  肿瘤免疫

分 类 号：R34[基础医学类]