文献类型：期刊文章

作　　者：徐家馨[1] 王静静[1] 王琳[1] 徐睿杰[1] 吴玉龙[1] 李波清[1] 乔媛媛[1]

XU Jiaxin;WANG Jingjing;WANG Lin;XU Ruijie;WU Yulong;LI Boqing;QIAO Yuanyuan(Department of Pathogen Biology,College of Basic Medicine,Binzhou Medical University,Yantai 264003,Shandong,China)

机构地区：[1]滨州医学院基础医学院病原生物学教研室,山东烟台264003

出　　处：《中国病原生物学杂志》

基　　金：山东省自然科学基金项目(No.ZR2020MH169)。

年　　份：2024

卷　　号：19

期　　号：11

起止页码：1251-1254

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2023、CAB、CSCD、CSCD2023_2024、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的构建具有潜在中和活性的人源抗大别班达病毒(SFTSV)抗体Fab片段的噬菌体展示文库。方法从具有交叉中和活性的SFTS恢复期患者血液样本中分离外周血单个核细胞(PBMC)并提取总RNA,逆转录PCR得到cDNA。以cDNA为模板进行第一轮PCR扩增,分别获得抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(Vκ和Vλ)序列。以pComb3XTT、pComb3Xλ质粒为模板,分别获得抗体重链恒定区(CH1)和轻链恒定区(Cκ、Cλ)序列。第二轮通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)扩增VH和CH1得到Fd重链,同样扩增Vκ和Cκ、Vλ和Cλ得到完整的κ和λ抗体轻链。第三轮以上述扩增产物为模板再次进行SOE-PCR,得到完整的抗体Fab基因片段。将Fab基因片段插入到pComb3XSS噬菌粒中,构建噬菌体展示抗体文库。结果通过三轮PCR扩增出抗体Fab片段的序列,成功构建库容量为1.875×10^(9)的噬菌体展示抗体文库。结论利用具有交叉中和活性的SFTS恢复期患者血源建立了人源抗SFTSV Fab片段的噬菌体展示抗体文库,为下一步筛选特异性单克隆中和抗体建立了可靠的前期基础。

关 键 词：SFTSV  噬菌体展示抗体文库  库容量 人源单克隆抗体

分 类 号：R392]