文献类型：期刊文章

作　　者：张桃苹[1] 陈露[1] 徐瑞贤[1] 贾亭[1] 石文刚[1] 何淑桢[1] 胡腾[1] 王永博[2] 宋玉竹[1] 韩芹芹[1] 夏雪山[1] 张金阳[1]

ZHANG Taoping;CHEN Lu;XU Ruixian;JIA Ting;SHI Wengang;HE Shuzhen;HU Teng;WANG Yongbo;SONG Yuzhu;HAN Qinqin;XIA Xueshan;ZHANG Jinyang(Molecular Medicine Research Centre of Yunnan Province,Faculty of Life Science and Technology,Kunming University of Science and Technology,Kunming 650500,China;Department of Clinical Laboratory,The First People's Hospital of Yunnan Province,Kunming University of Science and Technology)

机构地区：[1]昆明理工大学生命科学与技术学院,云南省分子医学研究中心,云南昆明650500 [2]昆明理工大学附属云南省第一人民医院临床检验科

出　　处：《中国病原生物学杂志》

基　　金：国家自然科学基金项目(No.81860625);云南省基础研究计划重点项目(No.202401AS070101);昆明理工大学“双一流”科技专项课题(No.202302AG050003-2);云南省“兴滇英才支持计划”青年人才专项项目(No.XDYC-QNRC-2022-0368)。

年　　份：2024

卷　　号：19

期　　号：9

起止页码：993-998

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2023、CAB、CSCD、CSCD2023_2024、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的克隆狂犬病毒(RABV)L蛋白的加帽酶功能域基因,构建原核表达载体,制备了多克隆抗体,为病毒诊断和抗病毒药物研发提供了有效工具。方法利用基因工程技术,扩增L蛋白加帽酶功能域的基因序列,与双酶切的pET-32a载体连接,获得pET-32a-RABV-L重组表达质粒。经过测序确认无碱基突变,将含pET-32a-RABV-L重组表达质粒的菌液扩大培养后,IPTG诱导表达重组蛋白。通过Ni-NTA亲和层析填料进行纯化,改变不同咪唑洗脱浓度,摸索出适合的洗脱条件。将纯化的蛋白与弗氏佐剂混合免疫小鼠,获得的小鼠多克隆抗体进行间接ELISA检测、Western blot检测、IFA检测。结果成功构建pET-32a-RABV-L原核表达质粒。RABV-L重组蛋白在大肠埃希菌中成功表达,大小约40 ku,且与His-tag的单克隆抗体发生特异性反应。免疫小鼠64 d后,采取的小鼠血清制备多克隆抗体,其工作效价达到25600,在Western blot检测和IFA检测中显示能特异性识别天然病毒L蛋白。结论成功表达、纯化RABV-L蛋白加帽酶功能域的重组蛋白,并成功获得特异性识别天然表位的多克隆抗体。

关 键 词：狂犬病毒(RABV)  L蛋白 重组表达  多克隆抗体

分 类 号：R392-33]