文献类型：期刊文章

作　　者：张凯跃[1,2] 李宗艳[1,2] 曹瑞晴[1,2] 孟琳琳[1,2] 胡祥维[2] 顾玉超[3] 王建刚[2]

ZHANG Kai-Yue;LI Zong-Yan;CAO Rui-Qing;MENG Lin-Lin;HU Xiang-Wei;GU Yu-Chao;WANG Jian-Gang(Key Laboratory of Marine Drugs,Ministry of Education,School of Medicine and Pharmacy,Ocean University of China,Shandong,Qingdao 266100,China;Kanglitai Biomedical(Qingdao)CO.,LTD,Shandong,Qingdao 266000,China;Department of Biological Engineering,College of Marine Science and Biological Engineering,Qingdao University of Science and Technology,Shandong,Qingdao 266044,China)

机构地区：[1]中国海洋大学海洋药物教育部重点实验室,中国海洋大学医药学院,山东青岛266100 [2]康立泰生物医药(青岛)有限公司,山东青岛266000 [3]青岛科技大学海洋科学与生物工程学院生物工程系,山东青岛266044

出　　处：《中国生物化学与分子生物学报》

基　　金：山东省重点研发计划2023(No.2023CXGC010510);青岛市关键技术攻关及产业化示范类项目(No.23-1-4-xxgg-14-nsh)资助。

年　　份：2024

卷　　号：40

期　　号：6

起止页码：857-866

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2023、CAS、CSCD、CSCD_E2023_2024、EMBASE、JST、PUBMED、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：白细胞介素35(interleukin-35,IL-35)是非常重要的免疫抑制性细胞因子,被证实在多种疾病的免疫应答中发挥作用。本研究通过克隆人IL-35基因编码序列,构建单亚基表达载体pXC17.4-p35和pcDNA3.1(+)-EBI3,共转染CHO-K1细胞体外表达IL-35,经检测未发现p35亚基与EBI3亚基的结合。Knobs-into-Holes(KIH)可解决异源抗体重链错配的问题,因此,在原始序列的基础上融合KIH结构构建表达载体pXC17.4-p35-Fch和pcDNA3.1(+)-EBI3-Fck来表达KIH-IL-35重组融合蛋白质;同时交换2个亚基的表达载体来验证不同表达载体对KIH-IL-35表达量的影响。经过多种蛋白质检测方法的分析,显示KIH-IL-35结构的正确表达率明显提高。大量表达后对KIH-IL-35进行亲和纯化,采用ELISA法检测纯化后的KIH-IL-35与糖蛋白130(gp130)分子的结合活性,结果表明,KIH-IL-35与gp130的结合呈浓度依赖性。采用细胞活性检测方法检测KIH-IL-35与M1细胞的间接活性,结果表明,M1细胞的抑制率与KIH-IL-35的浓度呈剂量依赖性增长。此外,本研究成功建立了一种利用激活的人外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)对IL-35进行活性检测的方法,结果显示,激活的PBMCs与KIH-IL-35的浓度呈剂量依赖性增长。总之,本研究利用KIH-IL-35模型,提高了重组人IL-35的正确表达率,并验证其在体外的高活性,为IL-35的研究及类似异源二聚体细胞因子的重组表达提供新思路。

关 键 词：人白细胞介素-35  Knobs-into-Holes  融合蛋白质  多聚体

分 类 号：Q786]