文献类型：期刊文章

作　　者：高璐[1] 蔡孟华[1,2] 许依[1,2] 何维[1] 陈慧[1,2] 张建民[1,2]

GAO Lu;CAI Menghua;XU Yi;HE Wei;CHEN Hui;ZHANG Jianmin(Department of Immunology,Key Laboratory for T Cell and Immunotherapy CAMS,State Key Laboratory of Common Mechanism Research for Major Disease,Institute of Basic Medical Sciences CAMS,School of Basic Medicine PUMC,Beijing 100005;Changzhou Xitaihu Institute for Frontier Technology of Cell Therapy,Changzhou 213000,China)

机构地区：[1]中国医学科学院基础医学研究所,北京协和医学院基础医学院,免疫学系,中国医学科学院T细胞与免疫治疗重点实验室,重大疾病共性机制研究全国重点实验室,北京100005 [2]常州西太湖细胞治疗前沿技术研究院,江苏常州213000

出　　处：《基础医学与临床》

基　　金：国家自然科学基金(82071791,32300745);中国医学科学院创新工程(2021-I2M-1-035)。

年　　份：2024

卷　　号：44

期　　号：7

起止页码：947-953

语　　种：中文

收录情况：CAS、DOAJ、IC、JST、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的体外验证过表达膜定位IL-3的293T细胞外泌体的功能,为在阿尔茨海默病模型动物的体内功能验证奠定基础。方法利用本课题组的专利结构,构建能定位于外泌体膜上的重组IL-3慢病毒载体,包装病毒感染293T细胞,筛选稳定表达细胞株。用流式细胞测量术和免疫荧光技术对IL-3的膜定位进行验证;超滤离心纯化IL-3外泌体,透射电镜观察外泌体形态;纳米流式测量术检测外泌体粒径分布及浓度;Western blot检测IL-3及外泌体相关标志蛋白质表达;免疫荧光技术检测其对小胶质细胞系BV-2吞噬Aβ淀粉样蛋白能力的影响。结果经过载体构建、病毒感染、嘌呤霉素筛选和验证,得到稳定过表达膜定位IL-3的293T细胞株;收集纯化外泌体,在透射电镜下可见直径50~100 nm的双层膜囊泡结构;免疫印迹结果显示CD63、ALIX、TSG101等多种外泌体标志蛋白质检测阳性,且与对照相比富含IL-3,提示IL-3外泌体纯化成功;免疫荧光技术检测结果显示IL-3外泌体能在体外促进BV-2细胞对Aβ淀粉样蛋白的吞噬作用。结论过表达膜定位IL-3的基因修饰293T细胞外泌体在体外兼具IL-3和外泌体的作用,能够促进小胶质细胞的吞噬作用,为阿尔茨海默病的临床治疗提供新的思路。

关 键 词：白细胞介素3(IL-3)  外泌体 小鼠脑小胶质细胞系(BV-2)  阿尔茨海默病  

分 类 号：R392.9]