文献类型：期刊文章

作　　者：饶欣悦[1,2] 崇金阳[1,2] 贺诚[1,2] 毕莹莹[1,2] 唐刚敏[1,2] 吕育财[1,2] 龚大春[1,2] 杨潇[1,2]

RAO Xinyue;CHONG Jinyang;HE Cheng;BI Yingying;TANG Gangmin;LÜYucai;GONG Dachun;YANG Xiao(Key Laboratory of Functional Yeast of China Light Industry,College of Biological and Pharmaceutical Sciences,China Three Gorges University,Yichang 443002,Hubei,China;Hubei Research Center of Bioenzyme Engineering Technology,College of Biological and Pharmaceutical Sciences,China Three Gorges University,Yichang 443002,Hubei,China)

机构地区：[1]三峡大学生物与制药学院中国轻工业功能酵母重点实验室,湖北宜昌443002 [2]三峡大学生物与制药学院湖北省生物酵素工程技术研究中心,湖北宜昌443002

出　　处：《生物工程学报》

基　　金：国家自然科学基金(32100946)。

年　　份：2024

卷　　号：40

期　　号：5

起止页码：1559-1570

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2023、CAS、CSCD、CSCD2023_2024、EAPJ、EMBASE、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：为了寻找一种准确高效的多片段组装及多点突变方案,将目前常用的多片段组装方法进行了整合与优化,并以果糖-1,6-二磷酸酶1(fructose-1,6-diphosphatase 1,FBP1)基因4位点突变为例进行验证。通过引入突变位点和Bsa I识别序列连接含有突变位点的片段,经过酶切/连接反应后扩增组装成功的目的片段,并引入与线性化载体两端同源的序列,最后进行片段与线性化载体的重组并转化大肠杆菌。经筛选与测序,得到4位点突变重组质粒。该方案弥补了常规的Gibson组装和Golden Gate组装的部分缺点,是一种高效进行多片段组装和多点突变的实验方案。

关 键 词：定点突变 多片段组装  ⅡS限制性内切酶  同源重组克隆  

分 类 号：Q78]