文献类型：期刊文章

作　　者：刘恋恋[1] 吉雨恬[1] 刘娇莉[1] 韩婧怡[1] 李开远[1] 张淳[1] 韩勇[1]

Liu Lianlian;Ji Yutian;Liu Jiaoli;Han Jingyi;Li Kaiyuan;Zhang Chun;Han Yong(Department of Physiology,School of Basic Medical Sciences,Zunyi Medical University,Zunyi Guizhou 563099,China)

机构地区：[1]遵义医科大学基础医学院生理学教研室,贵州遵义563099

出　　处：《遵义医科大学学报》

基　　金：国家自然科学基金资助项目(NO:32060201);遵义医科大学研究生科研基金课题(NO:ZYK167);遵义医科大学大学生创新创业训练计划项目(NO:S202310661002)。

年　　份：2024

卷　　号：47

期　　号：4

起止页码：361-370

语　　种：中文

收录情况：JST、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的 探讨GPR75受体偶联G_(αq)信号通路在20-HETE诱导的H9c2心肌细胞凋亡中的作用与机制。方法 H9c2心肌细胞采用慢病毒载体干扰GPR75表达,敲减效率通过RT-qPCR和Western blot法检测;ELISA法检测IP_(3)及cAMP含量;TUNEL法评估细胞凋亡率;分别使用Fluo-4/AM、DHE和JC-1荧光探针检测细胞内Ca^(2+)浓度、ROS含量以及线粒体膜电位(ΔΨm)水平;Western blot检测EGFR、ERK1/2、AKT、GSK3β、Bax、Bcl-2、Cyt C、Caspase-3蛋白表达。结果 慢病毒载体shGPR75转染后,H9c2心肌细胞GPR75受体mRNA和蛋白表达分别降低67.16%和63.99%(P<0.05)。敲减GPR75表达或应用AAA阻断其作用,显著抑制20-HETE诱导的H9c2心肌细胞凋亡(P<0.05),并可逆转ΔΨm下降及凋亡相关蛋白Bax、Cyt C、Caspase-3蛋白表达增高(P<0.05)。20-HETE处理后细胞内IP_(3)含量明显增加(P<0.05),但对cAMP生成无显著影响(P>0.05),而敲减GPR75表达、应用AAA或者PLC信号通路阻断剂U73122预处理后,可显著阻断细胞内IP_(3)生成(P<0.05)。敲减GPR75表达、应用AAA或者U73122预处理后,明显抑制20-HETE诱导的Ca^(2+)浓度升高和ROS生成效应(P<0.05)。20-HETE处理后,GPR75受体下游调控关键蛋白EGFR、ERK1/2、AKT、GSK3β磷酸化水平明显升高(P<0.05),敲减GPR75表达或应用AAA可有效阻断20-HETE上述效应(P<0.05)。最后,阻断PLC或PI3K信号通路,显著抑制20-HETE诱导的心肌细胞凋亡(P<0.05)。结论 20-HETE通过GPR75受体偶联的G_(αq)蛋白及其介导的PLC、EGFR/ERK1/2/AKT/GSK3β信号通路诱导H9c2心肌细胞凋亡。

关 键 词：20-羟二十烷四烯酸  G蛋白偶联受体75  G_(αq)蛋白  心肌细胞凋亡

分 类 号：R363.2] R542.2[基础医学类]