文献类型：期刊文章

作　　者：李欣[1] 高驰[2] 顾力行[2] 曾毅[2] 姚頔[2] 何红鹏[1] 张同存[1,2]

LI Xin;GAO Chi;GU Li-Xing;ZENG Yi;YAO Di;HE Hong-Peng;ZHANG Tong-Cun(Tianjin University of Science and Technology,School of Bioengineering,Department of Pharmacy,Tianjin 300457,China;Wuhan University of Science and Technology,College of Life Science and Health,Department of Biology,Wuhan 430081,Hubei,China)

机构地区：[1]天津科技大学生物工程学院药学系,天津300457 [2]武汉科技大学生命科学与健康学院生物学系,武汉430081

出　　处：《中国生物化学与分子生物学报》

基　　金：国家重点研发计划(No.2018YFA0901700)资助。

年　　份：2024

卷　　号：40

期　　号：4

起止页码：554-564

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2023、CAS、CSCD、CSCD_E2023_2024、EMBASE、JST、PUBMED、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：随着细胞治疗的快速发展,大规模慢病毒的生产成为工艺环节中的瓶颈,因此,优化293T高滴度和高纯度的CAR慢病毒载体生产工艺显得至关重要。本研究旨在优化包装慢病毒的293T贴壁细胞,节省时间,节约成本,提高慢病毒包装的能力。同时对优化慢病毒载体中出现悬浮细胞结团生长的现象进行探索,检测其影响结团的因素。分别采用快速、慢速驯化方式将293T贴壁细胞驯化为悬浮培养,并比较其细胞形态、细胞密度、细胞活率、慢病毒包装能力和冻存复苏后稳定一致性,筛选出最优的悬浮驯化条件。通过调节Ca^(2+)浓度和EDTA添加量来研究比较细胞结团生长状况。结果证明,使用无血清培养基OPM-293 CD05溶剂(medium)可以将293T贴壁细胞快速驯化为293T悬浮细胞,并能制备出慢病毒滴度且优于贴壁细胞的包装滴度(^(*)P<0.05)。Ca^(2+)浓度会影响细胞结团大小,添加EDTA能有效分离分散非必要的细胞抱团生长。研究结果显示,传统293T贴壁细胞可以使用无血清培养基OPM-293 CD05溶剂快速驯化成悬浮细胞;在一定范围内,Ca^(2+)浓度越高细胞所结团块及粒径越大,EDTA添加量越高细胞所结团块及粒径变小。这为优化慢病毒载体包装工艺和悬浮培养条件,同时为体外规模化细胞培养放大和生产奠定了理论基础,具有一定的实用价值。

关 键 词：慢病毒载体 293T细胞 悬浮驯化  悬浮细胞培养 结团  

分 类 号：Q813.1[生物工程类]