文献类型：期刊文章

作　　者：蔡睿[1] 张浩[1] 刘壮[1] 陈远华[1] 谢芬芬[1] 洪强[1]

Cai Rui;Zhang Hao;Liu Zhuang;Chen Yuanhua;Xie Fenfen;Hong Qiang(Dept of Histology and Embryology,School of Basic Medical Sciences,Anhui Medical University,Hefei 230032)

机构地区：[1]安徽医科大学基础医学院组织胚胎学教研室,合肥230032

出　　处：《安徽医科大学学报》

基　　金：国家自然科学基金(编号:82201804);安徽省自然科学基金(编号:2208085QH235);安徽高校科学研究项目(编号:KJ2021A0217);安徽医科大学校科研基金(编号:2021xkj007);安徽医科大学“早期接触科研”训练计划项目(编号:2021-ZQKY-149、2022-ZQKY-219)。

年　　份：2024

卷　　号：59

期　　号：3

起止页码：371-376

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2023、CAS、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的研究性别决定区Y框蛋白3(SOX3)对人卵巢颗粒细胞(KGN)增殖和雌二醇分泌的影响。方法在NCBI数据库Gene-Bank中搜索人SOX3(NM_005634.3)的基因序列,用PCR方法扩增目的基因SOX3,将其克隆到慢病毒载体pLV-EF1a-GFP-2A-Puro上,获得过表达慢病毒重组质粒pLV-EF1a-GFP-2A-Puro-SOX3;将测序正确的过表达慢病毒重组质粒以及包装质粒(pGag/Pol、pRev、pVSV-G)共同转染到人胚肾细胞系(HEK 293T)细胞中(pLV-SOX3组),将pLV-EF1a-GFP-2A-Puro及包装质粒(pGag/Pol、pRev、pVSV-G)共同转染到HEK 293T细胞中(pLV-NC组),转染48 h后收集两组慢病毒颗粒并测定病毒的滴度,将两组慢病毒感染KGN细胞,经嘌呤霉素筛选2周后,获得稳定表达的细胞系;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot法检测两组中SOX3的mRNA和蛋白水平;CCK-8法检测两组细胞增殖能力;ELISA测定两组雌二醇的浓度。结果PCR产物的鉴定和测序结果表明SOX3基因片段扩增成功,酶切和测序结果表明过表达慢病毒重组质粒构建完成;慢病毒感染HEK 293T细胞后可检测到绿色荧光,表明慢病毒包装成功;慢病毒感染KGN细胞后经嘌呤霉素筛选,荧光显微镜下观察细胞表达绿色荧光;RT-qPCR和Western blot检测结果均表明pLV-SOX3组中SOX3表达水平高于pLV-NC组(P<0.05)。CCK-8检测结果表明,pLV-SOX3组较pLV-NC组细胞增殖能力明显增强(P<0.01)。ELISA结果显示,pLV-SOX3组雌二醇浓度较pLV-NC组升高(P<0.05)。结论过表达转录因子SOX3能够促进KGN的增殖和雌二醇分泌。

关 键 词：SOX3  卵巢颗粒细胞 慢病毒载体 增殖  雌二醇 绿色荧光蛋白

分 类 号：R711.7]