文献类型：期刊文章

作　　者：于双嵘[1,2] 钱峰[1,2] 章海敏[1,2] 孙新强[3] 王普[1,2]

YU Shuangrong;QIAN Feng;ZHANG Haimin;SUN Xinqiang;WANG Pu(Key Laboratory of Pharmaceutical Engineering of Zhejiang Province,College of Pharmaceutical Science,Zhejiang University of Technology,Hangzhou 310014,Zhejiang,China;Key Laboratory for Green Pharmaceutical Technologies and Related Equipment of Ministry of Education,Zhejiang University of Technology,Hangzhou 310014,Zhejiang,China;Zhejiang Changhai Pharmaceutical Co.,Ltd.,Shaoxing 312000,Zhejiang,China)

机构地区：[1]浙江工业大学药学院浙江省制药工程重点实验室,浙江杭州310014 [2]浙江工业大学绿色制药技术与装备教育部重点实验室,浙江杭州310014 [3]浙江昌海制药有限公司,浙江绍兴312000

出　　处：《生物工程学报》

基　　金：国家重点研发计划(2022YFA0911804);国家自然科学基金(21676250);浙江省自然科学基金(LY22B060010)。

年　　份：2024

卷　　号：40

期　　号：3

起止页码：821-833

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2023、CAS、CSCD、CSCD2023_2024、EAPJ、EMBASE、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：(S)-1-(2-氟苯基)乙胺是药物合成中重要的手性砌块,ω-转氨酶被认为是一种催化制备手性胺的绿色、高效催化剂。本研究通过基因挖掘手段从NCBI数据库获得来源于氧化亚铁假古布尔班克氏菌(Pseudogulbenkiania ferrooxidans)的新型ω-转氨酶(PfTA),对其进行半理性设计,得到一株酶活性提高的突变株Y168R/R416Q,其可高选择性催化2-氟苯乙酮合成(S)-1-(2-氟苯基)乙胺,反应10 h后产率达83.58%,对映体过量值(enantiomeric excess,ee)大于99%。与野生型(wild type,WT)相比,突变株Y168R/R416Q的比酶活提高了11.65倍,达到47.04 U/mg,催化效率kcat/Km提高20.9倍。分子对接和结构模拟分析表明,突变后酶的活性口袋拓宽,底物2-氟苯乙酮进入酶活性中心的空间位阻减小,从而有效提高了突变体的催化效率。

关 键 词：(S)-1-(2-氟苯基)乙胺  ω-转氨酶  半理性设计  空间位阻

分 类 号：TQ460.32[化工与制药类]