文献类型：期刊文章

作　　者：万苗苗[1,2] 阳倩[1] 陈吉璐[1] 陈丹丹[1] 毛林[1] 班谦[1] 陈胜[2] 惠文巧[2]

WAN Miaomiao;YANG Qian;CHEN Jilu;CHEN Dandan;MAO Lin;BAN Qian;CHEN Sheng;HUI Wenqiao(Center for Stem Cell and Translational Medicine,School of Life Sciences,Anhui University,Hefei 230601,China;Anhui Province Key Laboratory of Livestock and Poultry Product Safety Engineering,Institute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine,Anhui Academy of Agriculture Sciences,Hefei 230031,China)

机构地区：[1]安徽大学生命科学学院,干细胞及转化医学研究中心,合肥230601 [2]安徽省农业科学院畜牧兽医研究所,畜禽产品安全工程安徽省重点实验室,合肥230031

出　　处：《中国草食动物科学》

基　　金：国家自然科学基金项目(31402048);安徽省重点研究和开发计划(202104e11020003);安徽省自然科学基金项目(2208085MC74);安徽省农业科学院重点实验室项目(2023YL016);安徽省肉羊良种联合攻关项目(340000211260001000431)。

年　　份：2024

卷　　号：44

期　　号：2

起止页码：27-31

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2023、CAS、JST、RCCSE、核心刊

摘　　要：细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-2(CDK2)是细胞通过和进入S期所必须的细胞周期调节激酶,与许多癌细胞的生长有关。然而,目前在山羊上关于CDK2基因敲除及相关功能的研究尚未见报道。研究采用CRISPR/cas9系统,首先设计CDK2基因的sgRNA片段,在合成CDK2 sgRNA核苷酸序列后,构建能够同时表达sgRNA和Cas9 D10A的质粒PYSY-CDK2 sgRNA,连接并转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,对转化子进行验证,最后转染HEK293T细胞,检测细胞荧光和细胞增殖。酶切和测序结果证明,CDK2基因敲除载体构建正确;荧光显微镜检测显示,细胞转染效率在75%以上;细胞增殖检测表明,山羊CDK2敲除质粒不会对人源细胞增殖产生影响。说明采用CRISPR/Cas9构建的载体,可为后续获得山羊CDK2基因缺失型细胞系,研究支原体肺炎感染引发的细胞凋亡分子机制提供理论依据。

关 键 词：CRISPR/Cas9  山羊 CDK2 基因敲除

分 类 号：S827.2]