文献类型：期刊文章

作　　者：张英婕[1] 周文锋[1] 邹亚文[1] 白一涵[1] 蒋一凡[1] 湛洋[1] 王乃东[1] 杨毅[1] 杜红梅[3] 王东亮[1,2]

ZHANG Yingjie;ZHOU Wenfeng;ZOU Yawen;BAI Yihan;JIANG Yifan;ZHAN Yang;WANG Naidong;YANG Yi;DU Hongmei;WANG Dongliang(Research Center of Reverse Vaccinology of Hunan Province/Hunan Provincial Key Laboratory of Protein Engineering in Animal Vaccines,College of Veterinary Medicine,Hunan Agricultural University,Changsha 410128,China;College of biology,Hunan University,Changsha 410012,China;Changde Animal Husbandry and Fishery Center,Changde 415003,China)

机构地区：[1]湖南农业大学动物医学院,兽用蛋白质工程疫苗湖南省重点实验室/兽用疫苗逆向创制湖南省工程研究中心,湖南长沙410128 [2]湖南大学生物学院,湖南长沙410012 [3]常德市畜牧水产事务中心,湖南常德415003

出　　处：《中国兽医科学》

基　　金：国家自然科学基金项目(32172844);湖南省自然科学基金项目(2023JJ40134);湖南省技术攻关“揭榜挂帅”项目(2021NK1030)。

年　　份：2024

卷　　号：54

期　　号：2

起止页码：217-225

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2023、CAB、CAS、CSCD、CSCD_E2023_2024、JST、RCCSE、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：本研究旨在制备猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白单克隆抗体(m Ab),为PCV2免疫学诊断方法的建立和应用提供特异性抗体。首先通过原核大肠杆菌表达系统表达PCV2 Cap蛋白,将纯化后的Cap蛋白在体外组装成病毒样颗粒(VLPs),以VLPs作为免疫原免疫BALB/c小鼠,使用杂交瘤细胞技术筛选能稳定分泌抗PCV2 Cap蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株。进一步制备单抗腹水并纯化,通过Western-blot和IFA方法对单克隆抗体的特异性进行鉴定。采用逐步截取法合成45条覆盖PCV2 Cap蛋白全长的短肽,并通过间接ELISA鉴定单克隆抗体识别的表位区域。利用两株mAbs对人工感染PCV2的猪肺脏组织进行免疫组化(IHC)检测鉴定。结果表明,成功筛选两株识别PCV2 Cap蛋白单克隆杂交瘤细胞株,分别命名为1A6和1A8,其中1A6重链为Ig G2b亚型,1A8重链为Ig G1亚型,轻链均为κ链,纯化后的抗体效价均达1∶656 100。IFA结果显示,两株mAbs均能与PCV2感染的PK-15细胞发生特异性反应;Western-blot结果显示,两株mAbs均与PCV2 Cap蛋白发生特异性反应,且不与PCV3和PCV4 Cap蛋白发生交叉反应;所获抗体均识别PCV2 Cap蛋白C端211-225 aa肽段;IHC检测结果表明,两株mAbs均能与感染PCV2的临床样品发生特异性免疫反应。本研究成功获得了两株单克隆抗体1A6和1A8,均能识别PCV2 Cap蛋白,具有良好的特异性,为PCV2免疫学诊断方法的建立及Cap蛋白生物学功能研究提供了重要生物材料。

关 键 词：猪圆环病毒2型 CAP蛋白 原核表达系统 病毒样颗粒 单克隆抗体

分 类 号：S852.659.2]