文献类型：期刊文章

作　　者：宋亚敏[1,2] 魏婧[1,2] 郭方正[1,2] 李柏青[1,2,3] 许涛[1,2,4] 汪洪涛[1,2,3]

SONG Yamin;WEI Jing;GUO Fangzheng;LI Baiqing;XU Tao;WANG Hongtao(Laboratory Center of Laboratory Medicine,College of Laboratory Medicine,Bengbu Medical College,Bengbu 233030,China;Anhui Key Laboratory of Basic and Clinical Immunology of Chronic Diseases,Bengbu Medical College;Department of Immunology,College of Laboratory Medicine,Bengbu Medical College;Department of Clinical Laboratory Diagnostics,College of Laboratory Medicine,Bengbu Medical College)

机构地区：[1]蚌埠医学院检验医学院检验医学实验中心,蚌埠233030 [2]蚌埠医学院慢性疾病免疫学基础与临床安徽省重点实验室 [3]蚌埠医学院检验医学院免疫学教研室 [4]蚌埠医学院检验医学院临床检验诊断学教研室

出　　处：《山西医科大学学报》

基　　金：安徽省自然科学基金项目(1908085MH252,2008085QH405);慢性疾病免疫学基础与临床安徽省重点实验室开放课题基金项目(KLICD-2002-Z3);呼吸系病临床基础安徽省重点实验室开放课题基金项目(HX2022-Z02);蚌埠医学院“512人才培育计划”项目(by51201309);蚌埠医学院研究生科研创新计划项目(Byycx22013,Byycx23078)。

年　　份：2023

卷　　号：54

期　　号：12

起止页码：1591-1599

语　　种：中文

收录情况：CAS、JST、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的克隆、表达和纯化结核分枝杆菌H37Ra株GroEL2蛋白,并进行生物信息学分析。方法以结核分枝杆菌H37Ra株基因组DNA为模板,PCR扩增GroEL2基因,克隆至pET-28a载体中,构建重组pET-28a-GroEL2载体,将其转化至BL21(DE3)菌株中,在异丙基硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactoside,IPTG)诱导表达后,利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)电泳分析表达产物,镍-亚氨基二乙酸(Ni-IDA)亲和层析柱纯化重组GroEL2蛋白,Western blot鉴定GroEL2的表达效果。利用生物信息学方法对GroEL2蛋白的理化性质、蛋白结构、抗原表位等进行预测。结果成功构建重组pET-28a-GroEL2表达载体,在大肠杆菌中以可溶形式表达GroEL2蛋白。Ni-IDA亲和层析柱纯化重组GroEL2蛋白,纯度达90%以上。生物信息学分析显示其能与多种蛋白相互作用,且存在多个潜在的T细胞、B细胞抗原表位。结论重组GroEL2蛋白具有良好的免疫反应性,可能是结核病新型疫苗和诊断方法开发的新靶点。

关 键 词：结核分枝杆菌 GroEL2蛋白  原核表达 蛋白纯化 生物信息学

分 类 号：R52]