文献类型：期刊文章

作　　者：李艳超[1,2] 郝香琪[1,2] 周沛[1,2]

LI Yanchao;HAO Xiangqi;ZHOU Pei(Guangdong Provincial Pet Engineering Technology Research Center,College of Veterinary Medicine,South China Agricultural University,Guangzhou 510642,China;Guangdong Provincial Key Laboratory of Prevention and Control for Severe Clinical Animal Diseases,College of Veterinary Medicine,South China Agricultural University,Guangzhou 510642,China)

机构地区：[1]华南农业大学兽医学院,广东省宠物工程技术研究中心,广东广州510642 [2]华南农业大学兽医学院,广东省兽医临床重大疾病综合防控重点实验室,广东广州510642

出　　处：《中国兽医学报》

基　　金：广东省自然科学基金资助项目(2022A1515010733,2023A1515012171);广州市科技局基础与应用基础专题基金资助项目(一般项目)(SL2022A04J00674)。

年　　份：2023

卷　　号：43

期　　号：6

起止页码：1149-1155

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2020、CAB、CAS、CSCD、CSCD_E2023_2024、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：利用新型CRISPR interference(CRISPRi)技术进行蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase-like endoplasmic reticulum kinase, PERK)目的基因PERK的敲低。首先,利用慢病毒包装系统经嘌呤霉素筛选后构建稳定表达dCas9-KRAB蛋白的MDCK细胞株。然后,设计靶向PERK转录起始位点(transcription start site, TSS)的特异性小向导RNA(small guide RNA,sgRNA),向该稳转细胞株转染表达sgRNA的质粒,通过qPCR检测PERK的mRNA表达水平;同时,内质网应激激活剂衣霉素(tunicamycin, Tu)处理该细胞后,通过qPCR检测PERK通路下游GRP78、GRP94、ATF4、GADD34和CHOP等基因mRNA的表达水平。最后,将犬细小病毒2型(canine parvovirus type 2,CPV-2)接种于PERK敲低的MDCK细胞株,通过绝对定量PCR测定不同时间点CPV-2的复制水平。结果表明,敲低PERK基因表达后,CPV-2的复制水平显著下降,说明PERK参与调控CPV-2的复制。以上结果为进一步探究内质网未折叠蛋白反应(endoplasmic reticulum unfolded protein response, UPR^(ER))对CPV-2复制的影响及病毒与宿主相互作用的分子机制研究奠定了基础。

关 键 词：PERK CRISPRi  CPV-2  

分 类 号：S852.2] S852.65[动物医学类]