文献类型：期刊文章

作　　者：郭屹锦[1] 景玮亮[2,3] 滕晋莹[2,3] 邸志权[2,3] 关云轩[2] 徐旭[2,3]

GUO Yijin;JING Weiliang;TENG Jinying;DI Zhiquan;GUAN Yunxuan;XU Xu(Department of Pharmacology,School of Chinese Material Medical,Tianjin University of Chinese Medicine,Tianjin 301617,China;Pharmacodynamics Research Center, Tianjin Tiancheng Drug Assessment Research Co., Ltd.;Research Unit for Drug Metabolism, Chinese Academy of Medical Sciences)

机构地区：[1]天津中医药大学中药学院药理教研室,天津301617 [2]天津天诚新药评价有限公司药效研究中心 [3]中国医学科学院药物代谢新技术创新单元

出　　处：《山西医科大学学报》

基　　金：中国医学科学院医学与健康科技创新工程项目(2019-I2M-5-020)。

年　　份：2023

卷　　号：54

期　　号：7

起止页码：1006-1012

语　　种：中文

收录情况：CAS、JST、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的 探索流式细胞术基于外周血样本预处理抗体量、样本放置时间、样本固定与否的最佳试验条件。方法 采集3只正常大鼠EDTA抗凝全血进行白细胞及淋巴细胞计数,随机定义为样本A,B,C,各样本分为4份,分别用于检测各淋巴细胞亚群CD3^(+),CD3^(-)CD45RA^(+),CD3^(+)CD4^(+),CD3^(+)CD8^(+)的含量,每份样本抗体上样量都以标示量1μg的1/4,1/2,1,2倍孵育并标记。根据试验结果,1/4倍抗体完全满足检测所需,又采集3只正常大鼠血液样本,随机定义为样本D,E,F,处理同样本A,B,C,每份样本抗体上样量都以标示量1μg的1/4,1/8倍孵育并标记。将1/4抗体标示量处理好的样本D,E,F,即刻上机检测(固定前),之后将样本分成两部分:一部分分别于固定后15 min,24 h上机检测;另一部分2~8℃避光保存,分别保存0.5,1.5,3 h后上机检测。结果 (1)各样本淋巴细胞数处于47万~100万。样本A,B,C抗体使用量降至0.25μg时,各样本淋巴细胞亚群比例没有显著性下降。样本D,F抗体使用量在标示量的1/8时,CD3^(+),CD3^(-)CD45RA^(+),CD3^(+)CD8^(+)细胞的比例显著降低(P<0.05),样本E淋巴细胞亚群数量未发生显著性变化。(2)与固定前比较,固定15 min后样本D,E,F的CD3^(+),CD3^(+)CD4^(+),CD3^(+)CD8^(+)细胞比例在各血样样本中均有不同程度的下降(P<0.05)。(3)非固定样本D,E,F中CD3^(+),CD3^(+)CD4^(+),CD3^(+)CD8^(+),CD3^(-)CD45RA^(+)测定值的总体变化趋势为随保存时间延长逐渐下降,而其中样本D中CD3^(-)CD45RA^(+)测定值在保存3 h时未发生显著性变化。(4)与固定保存15 min比较,固定保存24 h后样本D、E中CD3^(+),CD3^(+)CD4^(+)细胞比例显著下降(P<0.05),样本F淋巴细胞亚群数量未发生显著性变化。结论 淋巴细胞数处于47万~100万时,0.25μg检测抗体完全满足检测所需。样本固定、固定后放置过长时间、样本不固定放置1.5 h以上都会对淋巴细胞亚群数量产生一定影响。

关 键 词：流式细胞术 淋巴细胞亚群 抗体量  保存时间  多聚甲醛固定  

分 类 号：R-331]