文献类型：期刊文章

作　　者：李丹[1] 韩萌[1] 都建[1] 安然[1]

LI Dan;HAN Meng;DU Jian;AN Ran(Department of Biochemistry,School of Basic Medicine,Anhui Medical University,Anhui Key Laboratory of Pathogen Biology,Anhui Provincial Key Laboratory of Zoonoses,Hefei 230032,China)

机构地区：[1]安徽医科大学基础医学院生物化学教研室,病原生物学安徽省重点实验室,人畜共患病安徽高校省级重点实验室,安徽合肥230032

出　　处：《中国病原生物学杂志》

基　　金：国家自然科学基金项目(No.81902084)。

年　　份：2023

卷　　号：18

期　　号：8

起止页码：922-926

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2020、CAB、CSCD、CSCD2023_2024、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的制备抗弓形虫钙依赖蛋白激酶(TgCDPK3)多克隆抗体,为进一步探究TgCDPK3在弓形虫中的作用奠定基础。方法将酶切鉴定正确的原核重组表达载体pET28a-TgCDPK3转化BL21,使用IPTG诱导表达重组TgCDPK3蛋白,利用His-Ni Beads亲和层析法纯化重组pET-28a-TgCDPK3蛋白。取纯化蛋白用弗氏佐剂乳化后通过皮下多点注射免疫新西兰大白兔,一周后加强免疫,共2次。末次免疫后1周取血,分离血清,通过ELISA测定抗体效价,Western blot检测抗血清与内源天然TgCDPK3蛋白以及重组表达蛋白TgCDPK3的反应性。同时以该抗血清为一抗采用免疫荧光法进行TgCDPK3蛋白的定位。结果pET-28a-TgCDPK3转化BL21后表达相对分子质量为59×103的His-TgCDPK3蛋白,纯化后免疫新西兰大白兔,制备的抗血清抗体效价为1∶64000。Western blot检测该抗血清能识别来源于弓形虫ME-49株的TgCDPK3蛋白及外源重组TgCDPK3蛋白。免疫荧光检测显示TgCDPK3定位于弓形虫速殖子膜表面。结论成功制备TgCDPK3多克隆抗体,该抗体效价高且特异性强,可用于相关基础实验,为进一步探究TgCDPK3在弓形虫中的作用奠定了基础。

关 键 词：弓形虫 TgCDPK3  多克隆抗体 免疫荧光

分 类 号：R382.5]