文献类型：期刊文章

作　　者：何珊[1,2] 肖秋秋[2,3] 石梦婷[4] 李威仪[1,2] 彭哲慧[2,3] 程金芝[2,3] 吴家红[2,3]

HE Shan;XIAO Qiuqiu;SHI Mengting;LI Weiyi;PENG Zhehui;CHENG Jinzhi;WU Jiahong(School of Public Health,the key Laboratory of Environmental Pollution Monitoring and Disease Control,Ministry of Education,Gui zhou Medical University,Guiyang,Guizhou 550025 China;Key Laboratory of Modern Pathogen Biology and Characteristics,Basic Medical College,Guizhou Medical University;Department of Human Parasitology,Basic Medical College,Guizhou Medical University;Department of Clinical Laboratory,the People's Hospital of Anshun)

机构地区：[1]贵州医科大学公共卫生与健康学院环境污染与疾病监控教育部重点实验室,贵州贵阳550025 [2]贵州医科大学基础医学院现代病原生物学特色重点实验室 [3]贵州医科大学基础医学院人体寄生虫学教研室 [4]安顺市人民医院检验科

出　　处：《中国病原生物学杂志》

基　　金：国家自然科学基金项目(No.81760374)。

年　　份：2023

卷　　号：18

期　　号：7

起止页码：787-792

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2020、CAB、CSCD、CSCD2023_2024、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的通过原核表达系统制备白纹伊蚊(Aedes albopictus,Aa)ATG8,免疫BALB/c小鼠获得多克隆抗体,并验证抗体的实用性。方法从白纹伊蚊Aa23细胞中提取cDNA,通过PCR扩增AaATG8基因片段,然后与载体pET30a连接,构建原核表达载体pET30a-AaATG8并转化至大肠埃希菌DH5α感受态细胞,挑取单克隆进行PCR鉴定,提取质粒进行测序鉴定。再将重组质粒转化到大肠埃希菌BL21感受态细胞,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白rAa-ATG8,纯化透析后免疫Balb/c小鼠,制备多克隆抗体,采用ELISA检测抗体效价,并以该抗体为一抗采用Western blot检测不同物种ATG8蛋白的表达。结果成功构建原核表达载体PET30a-AaATG8并在大肠埃希菌中诱导表达目的蛋白。重组蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,ELISA检测其血清抗体效价为1∶640000;Western blot显示rAa-ATG8多克隆抗体可用于检测埃及伊蚊、中华按蚊、骚扰阿蚊、三带喙库蚊、家蝇ATG8蛋白,反应条带位于18、16或14 ku处。结论成功获得高效价的rAa-ATG8多克隆抗体,该抗体不仅可用于检测白纹伊蚊ATG8蛋白,还可用于检测埃及伊蚊、中华按蚊、骚扰阿蚊、三带喙库蚊、家蝇ATG8蛋白,为研究自噬在蚊虫以及其他物种中的作用奠定了基础。

关 键 词：白纹伊蚊 自噬相关蛋白8/ATG8  原核表达 抗体制备

分 类 号：R384.1]