文献类型：期刊文章

作　　者：章会斌[1] 刘阳光[1] 尚金男[1] 韩政[1] 周忍[1] 许黎明[1] 徐启隆[1] 郑先瑞[1] 殷宗俊[1] 张晓东[1]

ZHANG Hui-Bin;LIU Yang-Guang;SHANG Jin-Nan;HAN Zheng;ZHOU Ren;XU Li-Ming;XU Qi-Long;ZHENG Xian-Rui;YIN Zong-Jun;ZHANG Xiao-Dong(College of Animal Science and Technology/Anhui Provincial Key Laboratory of Genetic Resources Protection and Biological Breeding of Local Livestock and Poultry,Anhui Agricultural University,Hefei 230036,China)

机构地区：[1]安徽农业大学动物科技学院/地方畜禽遗传资源保护与生物育种安徽省重点实验室,合肥230036

出　　处：《农业生物技术学报》

基　　金：国家重点研发计划项目(2021YFD1301200);国家自然科学基金(31972531);安徽省高校协同创新项目(GXXT-2021-055)。

年　　份：2023

卷　　号：31

期　　号：7

起止页码：1333-1344

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2020、CAB、CAS、CSCD、CSCD2023_2024、JST、RCCSE、UPD、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：miRNA(microRNA,miR)是可参与基因转录后调控的内源性非编码小RNA,miR-10b是猪(Sus scrofa)卵巢闭锁过程中的一个关键调控因子,而其靶向基因同源性磷酸酶-张力蛋白(phosphatase and tensin homolog,PTEN)基因在细胞凋亡中起着重要作用。为探讨miR-10b和PTEN基因对猪卵巢颗粒细胞(pig ovarian granulosa cells,pGCs)凋亡的调控作用,本研究分别用miR-10b的模拟物及抑制物转染pGCs,构建过表达和抑制miR-10b的pGCs模型,采用流式细胞术检测过表达和抑制miR-10b对pGCs凋亡的影响。结果显示,过表达miR-10b极显著增加了pGCs凋亡率(P<0.01),抑制miR-10b表达后pGCs凋亡率极显著降低(P<0.01)。基于生物信息学分析可知,miR-10b能直接结合PTEN 3'UTR区。进一步构建通过荧光素酶报告基因载体,发现相对于pmirGLO-PTEN-WT与mimic NC共转染组,pmirGLO-PTEN-WT与miR-10b mimic共转染后的荧光活性更低(P<0.01),pmirGLO-PTEN-MUT与miR-10b mimic共转染,或与mimic NC共转染后,荧光活性无显著差异(P>0.05),pmiGLO与miR-10b mimic共转染,或与mimic NC共转染的荧光也无显著差异(P>0.05),通过双荧光素酶报告基因系统再次证实了miR-10b能靶向结合PTEN 3'UTR区,抑制PTEN基因表达。利用qPCR及Westren blot检测PTEN基因及其蛋白的表达水平,发现miR-10b可以抑制PTEN基因及其蛋白的表达水平。此外,在抑制miR-10b表达后,引入siRNA下调PTEN基因的表达,可以缓解miR-10b对pGCs凋亡的促进作用。本研究证实了miR-10b可以通过抑制靶基因PTEN的表达来调控pGCs凋亡,为深入了解pGCs的凋亡机制和研究卵泡发育提供了数据支持。

关 键 词：MIR-10B 同源性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)  颗粒细胞 猪  

分 类 号：S828]