文献类型：期刊文章

作　　者：刘欢[1,2] 刘亭[1] 陆定艳[3] 孙莉[1,2] 何俊奇[1,2] 李勇军[3] 王永林[1] 孙佳[1] 席晓岚[1,2]

LIU Huan;LIU Ting;LU Dingyan;SUN Li;HE Junqi;LI Yongjun;WANG Yonglin;SUN Jia;XI Xiaolan(Guizhou Provincial Key Laboratory of Pharmaceutics,State Key Laboratory of Functions and Applications of Medicinal Plants,Guizhou Medical University,Guiyang 550004;Department of Pharmaceutical Analysis,School of Pharmacy,Guizhou Medical University,Guiyang 550025;Engineering Research Center for the Development and Application of Ethnic Medicine and TCM(Ministry of Education),Guizhou Medical University,Guiyang 550004,China)

机构地区：[1]贵州医科大学,贵州省药物制剂重点实验室,省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室,贵州贵阳550004 [2]贵州医科大学药学院药物分析教研室,贵州贵阳550025 [3]贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心,贵州贵阳550004

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》

基　　金：国家自然科学基金(82060703,U1812403-5);贵州省省级科技计划项目(黔科合基础-2K[2022]重点037);贵州省普通高等学校科技拔尖人才项目(黔教合KY字[2021]033);贵州省优秀青年科技人才项目(黔科合平台人才[2021]5619号)。

年　　份：2023

卷　　号：39

期　　号：2

起止页码：103-108

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2020、CAS、CSCD、CSCD_E2023_2024、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的建立稳定表达人细胞色素P450氧化还原酶(POR)的Flp-In^(TM) CHO细胞系,为进一步建立稳定双表达人POR与人细胞色素P450(CYP)的细胞系奠定基础。方法构建POR重组慢病毒并感染Flp-In^(TM) CHO细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达,挑选转染细胞进行嘌呤霉素筛选和单克隆培养,以获得稳定转染细胞株。利用丝裂霉素C(MMC)细胞毒实验、实时荧光定量PCR和Western blot法检测细胞POR的表达,获得稳定表达POR的Flp-In^(TM) CHO-POR细胞株。构建稳定双表达POR和CYP2C19的Flp-In^(TM) CHO-POR细胞(Flp-In^(TM) CHO-POR-2C19)和单表达CYP2C19的Flp-In^(TM) CHO细胞(Flp-In^(TM) CHO-2C19),并用环磷酰胺(CPA)测定CYP2C19酶活性。结果与感染阴性对照病毒的Flp-In^(TM) CHO细胞相比,感染POR重组慢病毒的Flp-In^(TM) CHO细胞MMC代谢活性升高,POR mRNA和蛋白的表达水平增加,说明获得了可稳定表达POR的Flp-In^(TM) CHO-POR细胞。与Flp-In^(TM) CHO细胞相比,Flp-In^(TM) CHO-2C19的CPA代谢活性无显著差异,而Flp-In^(TM) CHO-POR-2C19的CPA代谢活性增加且明显高于Flp-In^(TM) CHO-2C19细胞。结论成功建立了稳定表达POR且可进一步用于CYP转基因细胞构建的Flp-In^(TM) CHO-POR细胞系。

关 键 词：人细胞色素P450氧化还原酶(POR)  慢病毒  Flp-In^(TM)CHO-POR细胞系  

分 类 号：Q554] Q559.9] R392-33[基础医学类]