文献类型：期刊文章

作　　者：刘春玲[1] 赵敏[2] 王大鹏[1]

LIU Chunling;ZHAO Min;WANG Dapeng(Department of Immunology,Binzhou Medical University,Yantai 264003,Shandong,P.R.China;Shandong Public Health Clinical Center,Jinan 250102,Shandong,P.R.China)

机构地区：[1]滨州医学院基础医学院免疫学教研室,山东烟台264003 [2]山东省公共卫生临床中心,山东济南250102

出　　处：《滨州医学院学报》

基　　金：国家自然科学基金(32070893);山东省自然科学基金(ZR2020MC070)。

年　　份：2023

卷　　号：46

期　　号：2

起止页码：126-132

语　　种：中文

收录情况：普通刊

摘　　要：目的构建新型慢病毒载体,以寻求最佳的miRNA加工途径功能性鉴定方法。方法通过一种双功能慢病毒载体同时表达报告分子绿色荧光蛋白(GFP)以及GFP特异性miRNA初级转录产物(pri-miRNA);后者利用内源性miRNA加工途径形成GFP特异性成熟miRNA,进而干扰报告分子GFP的表达,通过GFP的表达水平监控miRNA加工途径。结果在肿瘤细胞系和皮肤原代细胞中验证了此miRNA加工途径功能性鉴定方法。对照组pri-miRNA慢病毒感染后,无论是肿瘤细胞系还是皮肤原代细胞均在流式细胞仪上表现出明显的GFP蛋白表达;然而实验组GFP特异性pri-miRNA慢病毒感染后,细胞中GFP表达水平显著低于对照组(P<0.05)。其次在不同细胞状态下检测了此方法的有效性。无论在正常状态还是衰老状态下的人胚肺成纤维细胞,GFP特异性pri-miRNA慢病毒都显示出远低于对照组的GFP表达(P<0.05)。结论此双功能病毒载体能够准确检测内源性miRNA加工途径的运行状态。此方法具有普遍性,不受细胞类型和细胞状态的影响。

关 键 词：小分子核糖核酸  初始小分子核糖核酸  RNA干扰

分 类 号：R392]