文献类型：期刊文章

作　　者：刘昆梅[1] 张富蕊[2] 李欣[2] 张国林[3] 刘宏鹏[2] 郭乐[2]

LIU Kunmei;ZHANG Furui;LI Xin;ZHANG Guolin;LIU Hongpeng;GUO Le(Breeding Base of State Key Laboratory for Craniocerebral Diseases,Ningxia Medical University,Yinchuan 750021,Ningxia Hui Autonomous Region,China;不详)

机构地区：[1]宁夏医科大学颅脑疾病国家重点实验室培育基地,宁夏银川750021 [2]宁夏医科大学临床医学院宁夏临床病原微生物重点实验室,宁夏银川750021 [3]苏州市药品检验检测研究中心,宁夏苏州215000

出　　处：《中国生物制品学杂志》

基　　金：国家自然科学基金(32070930、82160497);宁夏重点研发计划(2020BFG02012);宁夏自然科学基金(2022AAC02034);宁夏高等学校科学研究项目(NGY2020043)。

年　　份：2023

卷　　号：36

期　　号：3

起止页码：310-314

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2020、CAB、CAS、CSCD、CSCD_E2023_2024、EMBASE、IC、JST、RCCSE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的 通过分子克隆、蛋白表达及纯化等技术获得重组幽门螺旋杆菌黏附素A(recombinant H.pylori adhesin A,rHpaA),免疫BALB/c小鼠,制备anti-HpaA多克隆抗体后,分析其抗体特异性。方法 利用Phyre2和DNAstar生物信息学软件分析rHpaA的三维结构及抗原性质;通过PCR长片段DNA合成技术获得黏附素HpaA基因,插入质粒pCzn1中,制备重组质粒pCzn1-rHpaA,转化E.coli Arctic Express(DE3),经IPTG诱导表达、Ni-IDA亲和层析纯化后,获得rHpaA蛋白,Western blot鉴定其反应原性。将rHpaA辅以弗氏佐剂免疫雄性BALB/c小鼠,共6只,制备antiHpaA多克隆抗体,ELISA法鉴定其抗体特异性。结果 rHpaA具有较好的三维结构及抗原性质。双酶切鉴定及基因测序证明,重组质粒pCzn1-rHpaA含有完全正确的HpaA基因序列。重组菌株pCzn1-rHpaA/Arctic Express可溶性表达目的蛋白rHpaA,约占上清总蛋白的68.3%,纯度达98.1%。rHpaA可与anti-His和anti-H.pylori抗体相结合;antiHpaA多克隆抗体可特异性识别rHpaA和H.pylori裂解物。结论 经低温诱导表达和蛋白纯化等技术,可获得高纯度目的蛋白rHpaA,制备的anti-HpaA多克隆抗体具有良好的特异性,为研究H.pylori相关诊断试剂奠定了实验基础。

关 键 词：幽门螺旋杆菌黏附素A  表达  纯化 多克隆抗体

分 类 号：Q819[生物工程类]