文献类型：期刊文章

作　　者：蔡思泽[1] 王斌[1]

CAI Size;WANG Bin(School of Biology and Biological Engineering,Guangdong Provincial Key Laboratory of Fermentation and Enzyme Engineering,South China University of Technology,Guangzhou 510006,China)

机构地区：[1]华南理工大学生物科学与工程学院,广东省发酵与酶工程重点实验室,广东广州510006

出　　处：《现代食品科技》

基　　金：广东省自然科学基金资助项目(2022A1515010291)。

年　　份：2023

卷　　号：39

期　　号：3

起止页码：129-137

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2020、CAB、CAS、IC、RCCSE、SCOPUS、UPD、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：胶原蛋白在人体内有重要作用,并且在食品、保健品、医疗等方面有广泛应用。该研究针对毕赤酵母的密码子偏好性对人源Ⅲ型胶原蛋白基因进行了密码子优化,在此基础上构建了人源Ⅲ型胶原蛋白单串联、二串联和二串联四拷贝表达载体pPIC9K-COL3-S、pPIC9K-COL3-2和pPIC9K-COL3-4,转化毕赤酵母GS115实现了人源Ⅲ型胶原蛋白的整合表达,获得了胶原蛋白单串联、胶原蛋白二串联和胶原蛋白二串联四拷贝的毕赤酵母工程菌株。对pPIC9K-COL3-S、pPIC9K-COL3-2重组菌株进行了摇瓶模拟高密度发酵,甲醇诱导浓度为0.5%,经SDS-PAGE和Western Blot检测,重组菌株成功表达了重组胶原蛋白,其中单串联蛋白表观分子量约为26.7 ku,双串联蛋白表观分子量约为52.3 ku。四拷贝重组菌株在0.5%甲醇诱导下的高密度摇瓶发酵产量最高,在最佳诱导时间为72 h时,蛋白产量达到约0.45 g/L。通过镍柱纯化后获得高纯度重组蛋白,抗氧化活性实验表明,重组胶原蛋白DPPH自由基清除率达到51.49%、ABTS自由基清除率达到41.24%,证明具有抗氧化活性,为其在食品,保健品和医疗领域的应用提供理论依据。

关 键 词：胶原蛋白 毕赤酵母 重组表达  抗氧化

分 类 号：TQ920.1] Q78]