文献类型：期刊文章

作　　者：王楚彤[1,4] 袁美丽[1,4] 魏婧[1,4] 李敏英[1,4] 许涛[1,3,4] 汪洪涛[1,2,4]

WANG Chutong;YUAN Meili;WEI Jing;LI Minying;XU Tao;WANG Hongtao(Laboratory Medicine Experimental Center,Laboratory Medicine College,Bengbu Medical College)

机构地区：[1]蚌埠医学院检验医学院检验医学实验中心,安徽蚌埠233030 [2]蚌埠医学院检验医学院免疫学教研室 [3]蚌埠医学院检验医学院临床检验诊断学教研室 [4]蚌埠医学院慢性疾病免疫学基础与临床安徽省重点实验室

出　　处：《长治医学院学报》

基　　金：安徽省自然科学基金项目(1908085MH252,2008085QH405);蚌埠医学院研究生科研创新计划项目(Byycx21008,Byycxz21016)。

年　　份：2023

卷　　号：37

期　　号：1

起止页码：1-7

语　　种：中文

收录情况：JST、普通刊

摘　　要：目的:构建结核分枝杆菌pET28a-PPE59原核表达载体,异丙基-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达和纯化获得PPE59蛋白;同时对PPE59蛋白进行生物信息学分析,预测其可能结构和功能。方法:以H37Rv基因组为模板扩增获得PPE59基因,利用同源重组将其克隆至原核表达载体pET28a,后转化至大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,采用Ni~+-NTA亲和层析柱对PPE59蛋白进行纯化,获得重组PPE59蛋白并进行鉴定。使用Protparam、NetPhos 3.1 Servera、ABCpred、SYEPEITHI等软件对PPE59蛋白的理化性质、磷酸化位点和T、B细胞表位等进行预测和分析。结果:成功构建pET28a-PPE59重组载体,经诱导表达和纯化,成功获得PPE59蛋白;生物信息学预测发现,PPE59有2个开放阅读框,31个磷酸化位点,并含有多个T细胞和B细胞抗原表位。结论:成功构建pET28a-PPE59表达载体,获得高纯度PPE59蛋白,且被抗His-tag小鼠单抗特异性识别;PPE59具有大量的磷酸化位点及丰富的T、B细胞表位,可作为结核病疫苗的重要候选蛋白之一。

关 键 词：结核分枝杆菌 PPE59蛋白  原核表达 生物信息学

分 类 号：R378.911]