文献类型：期刊文章

作　　者：岳威[1] 张炬庆[1] 吴晓龙[1] 杨昕淳[1] 沈巧艳[1] 于帅[1] 祝振硕[1] 王承宝[2] 张仕强[1] 华进联[1]

YUE Wei;ZHANG Juqing;WU Xiaolong;YANG Xinchun;SHEN Qiaoyan;YU Shuai;ZHU Zhenshuo;WANG Chengbao;ZHANG Shiqiang;HUA Jinlian(Shaanxi Stem Cell Engineering and Technology Research Center,College of Veterinary Medicine,Northwest A&F University,Yangling 712100,Shaanxi,China;Department of Preventive Veterinary Medicine,College of Veterinary Medicine,Northwest A&F University,Yangling 712100,Shaanxi,China)

机构地区：[1]西北农林科技大学动物医学院、陕西省干细胞工程技术研究中心,陕西杨凌712100 [2]西北农林科技大学动物医学院预防兽医系,陕西杨凌712100

出　　处：《生物工程学报》

基　　金：国家自然科学基金(32072806);陕西省重点科技创新团队项目(2019TD-036);陕西省重点研发计划(2022NY-044)。

年　　份：2023

卷　　号：39

期　　号：1

起止页码：192-203

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2020、CAS、CSCD、CSCD2023_2024、EAPJ、EBSCO、EMBASE、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophage,PAM)是包括猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)在内的多种高致病病毒的受体细胞,是研究病毒与宿主互作机制的重要模型。然而PAM来源有限,难以满足当前需求。利用猪诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)向巨噬细胞定向诱导是解决PAM细胞数量不足的有效方法。CD163是PAM细胞的重要标记,也是PRRSV等病毒的主要受体。建立实时报告CD163激活程度的报告系统对于建立并优化猪iPSCs向PAM的诱导分化体系具有指导意义。本研究利用CRISPR/Cas9介导的基因编辑系统,设计靶向CD163终止密码子的sgRNA并构建相应的打靶载体,将其导入到猪PAM中的检测报告系统。进一步将该报告系统导入猪iPSCs中,通过碱性磷酸酶染色、免疫荧光染色和EDU染色等手段来检测其安全性。将猪内源CD163的报告载体系统转染至原代PAM中,检测到了红色荧光的表达,证明了该载体系统的可靠性;将CD163-reporter系统转染至猪iPSCs中,获得CD163 reporter-iPSCs。结果表明,CD163 reporter-iPSCs可以维持正常的多能性基因的表达,并具有与正常猪iPSCs一致的克隆形态和增殖能力。证实成功构建了CD163的报告载体,并将其转染至猪iPSCs,获得含有CD163报告载体的猪iPSCs系。该报告载体既不影响猪iPSCs的多能性,又能够实时指示CD163的表达,为深入解析猪iPSCs分化为PAM的机制以及解析PRRSV等重大病原与宿主的互作研究奠定了基础。

关 键 词：CD163  猪繁殖与呼吸综合征病毒 诱导多能干细胞 报告载体  CRISPR/Cas9  猪  

分 类 号：S828]