文献类型：期刊文章

作　　者：简思杰[1,2] 晁嘉[1,2] 孙薇[1,3] 陈锐[1,4] 丁锐[1,4] 陈琛[1,3,5] 刘祥[1,2]

JIAN Sijie;CHAO Jia;SUN Wei;CHEN Rui;DING Rui;CHEN Chen;LIU Xiang(Chinese-German Joint Institute for Naturel Product Research/College of Biological Sciences and Engineering,Shaanxi University of Technology,Hanzhong 723001,China;School of Biology and Food Engineering,Fuyang Normal University,Fuyang 236037,China;Qinling-Bashan Mountains Bioresources Comprehensive Development C.I.C.,Hanzhong 723001,China;Qinba State Key Laboratory of Biological,Hanzhong 723001,China;Shaanxi Province Key Laboratory of Bio-resources,Hanzhong 723001,China)

机构地区：[1]陕西理工大学生物科学与工程学院/中德天然产物研究所,陕西汉中723001 [2]阜阳师范大学生物与食品工程学院,安徽阜阳236037 [3]陕南秦巴山区生物资源综合开发协同创新中心,陕西汉中723001 [4]陕西理工大学秦巴生物资源与生态环境省部共建国家重点实验室(培育),陕西汉中723001 [5]陕西省资源生物重点实验室,陕西汉中723001

出　　处：《河南农业科学》

基　　金：陕西省科技厅面上项目(2022JM-120);国家外国专家局项目(GDT20186100426)。

年　　份：2022

卷　　号：51

期　　号：11

起止页码：135-144

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2020、CAB、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：为探究嗜水气单胞菌外膜蛋白AHA1182的免疫原性,依据AHA1182氨基酸序列,采用生物信息学分析嗜水气单胞菌、杀鲑气单胞菌、简氏气单胞菌、多样气单胞菌、舒氏气单胞菌、产碱普罗维登斯菌以及爱德华氏菌之间的亲缘关系;构建AHA1182原核表达菌株并确定最佳诱导表达条件;采用包涵体洗涤及SDS-PAGE切胶纯化方法获得AHA1182蛋白并免疫红鲫;利用Western blot检测红鲫抗AHA1182蛋白血清的特异性与效价;采用酶联免疫吸附(ELISA)法模拟红鲫抗AHA1182蛋白抗体血清与嗜水气单胞菌的体外相互识别作用;通过测定酸性、碱性磷酸酶(ACP、AKP)活性与细胞吞噬作用,评价非特异性免疫;利用组织病理学切片探究AHA1182蛋白免疫对红鲫内脏的影响。结果显示,AHA1182蛋白家族在不同菌株间均具有亲缘性,尤其在气单胞菌间亲缘关系较近,由此推测,AHA1182蛋白抗血清具有交叉免疫保护作用;成功克隆、表达、纯化AHA1182,最佳诱导条件:菌液浓度OD_(600)=1.0,IPTG终浓度为0.5 mmol/L,在28℃条件下诱导8 h;红鲫AHA1182蛋白抗血清具有良好的特异性,AHA1182蛋白抗体与嗜水气单胞菌特异性结合(滴度可达1∶3200);AKP、ACP、细胞吞噬作用均显示,AHA1182蛋白可激活红鲫非特异性免疫。从组织病理学切片可以看出,AHA1182蛋白对红鲫内脏结构无影响。综上,嗜水气单胞菌AHA1182蛋白具有良好的免疫原性。

关 键 词：嗜水气单胞菌 外膜蛋白AHA1182  原核表达 免疫原性 红鲫血浆  组织病理学切片  主动免疫

分 类 号：S852.4] Q71[动物医学类]