文献类型：期刊文章

作　　者：唐愈菲[1] 黄泽智[1] 赵爽[1] 李冉辉[2,3]

TANG Yu-fei;HUANG Ze-zhi;ZHAO Shuang;LI Ran-hui(Department of medical laboratory technology,College of medical technology,Shaoyang University,Hunan Shaoyang 422600;Institute of Pathogen Biology,Hengyang Medical School,University of South China;College of Basic Medical Sciences,Youjiang Medical University for Nationalities)

机构地区：[1]邵阳学院医学技术学院医学检验技术教研室,湖南邵阳422600 [2]南华大学衡阳医学院病原生物学研究所 [3]右江民族医学院基础医学院

出　　处：《中国病原生物学杂志》

基　　金：湖南省自然科学基金项目(No.2020JJ5522)。

年　　份：2022

卷　　号：17

期　　号：10

起止页码：1140-1144

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2020、CAB、CSCD、CSCD2021_2022、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的利用生物信息学方法分析肺炎支原体GrpE蛋白的生物学特性,纯化MpGrpE蛋白并制备多克隆抗体。方法从NCBI网站获得肺炎支原体GrpE蛋白的氨基酸序列,并将其与大肠埃希菌、结核分枝杆菌、解脲脲原体、生殖支原体、鸡毒支原体和龟支原体的GrpE蛋白进行序列比对。利用生物信息学软件分析预测MpGrpE蛋白的信号肽、跨膜区、细胞定位、磷酸化和糖基化修饰、二级结构、三级结构、B细胞表位和作蛋白等生物学特性。将重组质粒pET28a-MpGrpE转化大肠埃希菌,诱导表达后通过Ni亲和层析纯化重组MpGrpE蛋白。用重组蛋白免疫小鼠,获得抗血清并测定抗体滴度。结果MpGrpE蛋白与生殖支原体GrpE蛋白同源性为73%。MpGrpE蛋白共有217个氨基酸,分子式CHNOS,理论分子质量为24.7ku,理论等电点为7.7,为不稳定的疏水性蛋白。MpGrpE蛋白无信号肽,无跨膜区,定位在胞质。该蛋白含有8个丝氨酸、4个苏氨酸和2个酪氨酸磷酸化位点,无糖基化位点。其二级结构中α螺旋占69.12%,β折叠占8.29%,无规卷曲占18.89%,β转角占3.69%。MpGrpE蛋白83.2%的三级结构为最佳状态。MpGrpE蛋白含有4个连续的B表位和4个非线性表位。MpGrpE蛋白的的互作蛋白有DnaK、GroS、GroL等。通过Ni亲和层析获得了较高纯度的MpGrpE蛋白,用该蛋白免疫小鼠能够诱导产生IgG抗体。结论生物信息学分析MpGrpE蛋白是定位在肺炎支原体胞质的一种疏水性蛋白,克隆表达的MpGrpE蛋白具有良好的免疫原性,为肺炎支原体的致病机制以及疫苗研发提供了实验基础。

关 键 词：肺炎支原体 核苷酸交换因子  生物信息学 多克隆抗体

分 类 号：R375.2]