文献类型：期刊文章

作　　者：于雯[1,3] 郑亮[2,3] 王宏宇[1,3] 高鑫誉[1,3] 吴志军[1,2,3] 曹宏伟[1,2,3] 张华[1,2,3]

Yu Wen;Zheng Liang;Wang Hongyu;Gao Xinyu;Wu Zhijun;Cao Hongwei;Zhang Hua(College of Life Science and Technology,Heilongjiang Bayi Agricultural University,Daqing163319;College of Animal Science and Technology,Heilongjiang Bayi Agricultural University;Biotechnology Center,Heilongjiang Bayi Agricultural University)

机构地区：[1]黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院,大庆163319 [2]黑龙江八一农垦大学动物科技学院 [3]黑龙江八一农垦大学生物技术中心

出　　处：《黑龙江八一农垦大学学报》

基　　金：黑龙江八一农垦大学青年创新人才项目(CXRC2016-12)。

年　　份：2022

卷　　号：34

期　　号：5

起止页码：85-91

语　　种：中文

收录情况：JST、普通刊

摘　　要：囊膜蛋白(E蛋白)是新型冠状病毒(Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus-2,SARS-CoV-2)的小包膜蛋白,在调控冠状病毒复制方面有重要作用。为了更有利地研究SARS-CoV-2 E蛋白的生物学功能,研究成功构建了SARS-CoV-2 E基因的真核表达载体。首先,通过PCR技术扩增SARS-CoV-2 E基因,并将pCMV-Myc载体进行双酶切。随后,利用同源重组将SARS-CoV-2 E基因连接至pCMV-Myc载体。经酶切和测序鉴定发现,SARS-CoV-2 E基因成功克隆至pCMV-Myc载体中,并将重组质粒命名为pCMV-Myc-SARS-CoV-2-E。将重组质粒pCMV-Myc-SARS-CoV-2-E转染至HEK-293T细胞,利用Western Blot和间接免疫荧光技术检测重组质粒的表达以及定位情况。结果表明,重组质粒pCMV-Myc-SARS-CoV-2-E在HEK-293T细胞中成功表达,并且发现重组蛋白主要分布于胞质,少量存在于胞核,为进一步研究SARS-CoV-2 E蛋白的功能奠定基础。

关 键 词：新型冠状病毒 E基因 真核载体构建  蛋白表达

分 类 号：Q78]