文献类型：期刊文章

作　　者：司艳芳[1,2] 岳锋[1] 郭东光[1] 齐永华[1] 李鹏[1] 孙国鹏[1] 李新丽[2] 马钰鑫[2] 王选年[1]

SI Yan-Fang;YUE Feng;GUO Dong-Guang;QI Yong-Hua;LI Peng;SUN Guo-Peng;LI Xin-Li;MA Yu-Xin;WANG Xuan-Nian(Biotechnology Research Center,Xinxiang University,Xinxiang 453000,China;Three-dimensional Printing School,Xinxiang University,Xinxiang 453000,China)

机构地区：[1]新乡学院,生物技术研究中心,新乡453000 [2]新乡学院3D打印学院,新乡453000

出　　处：《食品安全质量检测学报》

基　　金：国家自然科学基金项目(32102632);2018年国家重点研发计划项目(2018YFC1602902);河南省科技攻关项目(192102110066);河南省高等学校重点科研项目(19A230009);新乡市科技攻关项目(GG2019019)。

年　　份：2022

卷　　号：13

期　　号：21

起止页码：6923-6931

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2020、CAB、CAS、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的建立一种以单链抗体为基础的酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)快速检测畜禽产品中西马特罗(cimaterol,CIM)药物残留。方法以重氮化法合成的西马特罗完全抗原CIM-牛血清白蛋白(bovine albumin,BSA)免疫新西兰大白兔,用兔脾细胞总RNA反转录合成c DNA第一链,设计引物扩增兔源抗体重链可变区(heavy chain variable region,VH)和轻链可变区(light chain variable region,VL),通过45 bp的连接肽(Linker)使用新型重叠延伸聚合酶链式反应技术(splicing by overlap extension polymerase chain reaction,SOE-PCR)连接成VH-Linker-VL并大量制备;利用噬菌体表面展示技术将单链抗体(single-chain variable fragment,Sc Fv)片段与噬菌体展示载体p CANTAB-5e连接,电转化至大肠杆菌TG1感受态细胞,得到兔源噬菌体Sc Fv抗体库。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)判断是否偶联成功,用紫外(ultraviolet,UV)扫描及基质辅助激光解析串联飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption tandem time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)测定人工抗原的偶联比。用ELISA测定免疫兔血清质量。鉴定合成抗体库并对抗体库进行4轮淘选,取最优的CIM-Sc Fv进行氨基酸序列分析。结果CIM-BSA及CIM-鸡卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)偶联比分别为8:1及10:1,免疫血清校价为1:32000,半数抑制浓度为9.77 ng/m L,标准曲线的拟合度为0.997。抗西马特罗兔源噬菌体Sc Fv免疫库的插入率为92%,库容为1×1010 pfu,多样性为83.3%,经淘选获得一株与CIM有结合活性的噬菌体Sc Fv菌。结论西马特罗完全抗原的合成效果良好,可用于建立西马特罗检测方法,兔源噬菌体抗体库为快速获得CIM单链抗体奠定基础,为西马特罗快速检测提供了新思路。

关 键 词：畜禽产品 西马特罗  重氮化法  兔源噬菌体抗体库  单链抗体 噬菌体展示

分 类 号：TS207.5]